2018两种培养基对胚胎质量和IVF—ET妊娠率发展策略

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　　辅助生殖技术成为女性不孕症的重要治疗方法，为人类不经过两性性交，通过医学技术和手段使卵子和精子内的配子、合子进行人工结合，帮助卵子授精形成胚胎，达到使女性受孕的目的[1]。辅助生殖技术通过人工辅助方法，使繁衍后代的这一自然过程中的某一部分或所有环节通过人工技术手段来完成。继英国医生应用体外授精-胚胎移植技术（IVF-ET）使1例不孕妇女在1978年成功分娩1名婴儿之后，便在世界各国得到广泛应用，使人类生殖医学的探索研究得到了有力推进。我国体外授精胚胎移植技术在80年代末引进，1988年随着我国第一例试管婴儿的诞生，标志着我国也跨入了该领域的技术研究[2]。人类体外授精-胚胎移植周期中，优质移植胚胎的数量与临床妊娠率有着直接关系。如何能形成更为优质的移植胚胎是生殖医学专家一直关注的热点问题，随着单胚胎移植技术的不断推广，对于移植胚胎的质量提出了更高的要求。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料
　　选取笔者所在医院2013年期间试管婴儿室进行的体外授精-胚胎移植技术治疗的患者34例（周期），根据患者来院的时间顺序进行分组，分别为A组和B组，每组研究对象17个周期。A组研究对象年龄23～34岁，平均（31.22.2）岁，原发不孕（6.40.5）年，继发不孕（7.20.4）年。B组研究对象年龄在22～35岁，平均年龄（32.32.3）岁，原发不孕（8.30.4）年，继发不孕（6.40.3）年。两组患者不孕原因为输卵管阻塞、盆腔因素、排卵障碍以及其他不明原因等。两组患者年龄、不孕时间、不孕原因等一般资料比较差异无统计学意义（P0.05），具有组间可比性。
　　1.2 研究方法
　　两组患者均采用常规体外授精-胚胎移植技术促排卵方案，在注射hCG后的36 h在阴道超声的检测引导下，经阴道穿刺取出卵子。术后再留取男性精液备用。在取卵当日，先对卵子识别卵冠丘复合体，再转移到培养液中，先对血迹进行漂洗再移植到培养液中进行培养，促使卵子进一步发育成熟[3]。精液收集后按照世界卫生组织标准分析法对精液进行常规分析，采用梯度离心洗涤，再进行上游法进行处理，吸取上层精子混悬液在培养液中进行稀释。在取卵第4～6 h进行授精操作，精子浓度需要保证在（3～50）万条/ml。授精操作采用微滴法，卵裂期和移植期均在相应培养液中进行。在卵子授精后第20 h，除去卵子周围细胞，然后更换培养液，密切观察卵子授精情况。
　　A组受精卵子采用earles培养液，在授精后第48 h观察受精卵卵裂情况，对胚胎发育进行评分，选取2～4个细胞进行胚胎移植。B组使用HTF培养液，并观察受精卵卵裂情况。根据受精卵数量决定移植数量，当受精卵数量少于10个时，在授精的第48 h取2～4个细胞进行胚胎移植，当受精卵数量大于10个时，在授精后的第72 h取4～8个细胞进行胚胎移植。两组均采用灭活的人血血清为子培养液，培养液均在卵子授精前24 h配制，并且放在37 ℃的二氧化碳培养箱内平衡过夜。在胚胎移植时先选取发育较好的优质胚胎。
　　根据患者具体情况给hCG黄体支持治疗[4]，在胚胎移植14 d后进行尿液检测或血液检测hCG的含量。
　　1.3 评价指标
　　评价两组接受体外授精-胚胎移植技术的相关指标：卵子授精率、卵裂率、移植周期妊娠率、优质胚胎率、种植率[5]。优质胚胎判断标准为：卵子卵裂大小均匀，形态发育规整，细胞质均匀，细胞质不含碎片并且细腻。生化妊娠诊断标准为：血液及尿液hCG结果均阳性；临床妊娠诊断标准：在诊断妊娠4周后进行超声检查，通过超声检查可见妊娠囊、胎心、胚芽等。
　　1.4 统计学处理
　　采用SPSS 11.3软件进行统计分析，计量资料以（xs）表示，采用t检验；计数资料采用字2检验。P0.05为差异有统计学意义。
　　2 结果
　　A组的17个治疗周期中胚胎移植17个周期，妊娠率为12.7%，卵裂率为96.3%，优质胚胎率为21.6%，着床率为3.7%；B组17个治疗周期中胚胎移植17个周期，妊娠率为60.0%，卵裂率为97.8%，优质胚胎率为37.0%，着床率为19.2%；A组的卵裂率与B组比较差异无统计学意义（P0.05）；A组的优质胚胎率、妊娠率、着床率均低于B组（P0.05），详见表1。
　　3 讨论
　　辅助生殖技术是当代医学治疗不孕不育的一场革命，其打破人类繁衍的自然过程，为人类治疗不孕症提供了有力的支撑[6-8]。随着胚子与胚胎培养技术的不断提高，辅助生殖技术的成功率也随之增加。胚胎发育是一个复杂的动态过程，受精卵和胚胎的形态、受精卵的发育速度都能影响到胚胎的整个发育过程。体外授精-胚胎移植技术的成功率一般在百分之三十左右，随着生殖医学的不断发展，近些年该技术的妊娠率正逐年提高。笔者所在医院自成立体外授精-胚胎移植室以来，通过多年来的不断探索，总结发现妊娠率的提高与使用何种培养液的培养基有密切关系。
　文献[9-10]报道，卵子在较高浓度精子微滴中孵育较长时间，精子自身产生的水解酶、自由基等物质会对卵子造成伤害，缩短精子与卵子的孵育时间可明显改善胚胎质量、提高妊娠率。并且高浓度的精子也可发生多精授精的情况，授精液的精子数量过多，对卵子、胚胎及临床妊娠结局都有严重影响。在自然界中可以达到卵子周围的精子数量仅为十条左右，是因为女性生殖道的多种生殖屏障淘汰、选择出质量最优的精子。而在体外授精过程无法模拟出生理选择精子的方式，只能通过提高精子数量的方法对精子进行自然选择。精子数量的增多意味着可产生优质胚胎的几率增加。学术界普遍担心的精子数量较多产生的氧化活性物质会伤害卵子，近期研究表明，精子产生的活性氧物质对顶体、活化、获能等过程是必须物质[11-15]。且精子浓度应有相应的维持量。
　　本次研究结果显示，A组的优质胚胎率、妊娠率、着床率均低于B组（P0.05）。因此，胚胎培养基使用的不同可影响胚胎质量。另外，由于患者年龄、胚胎质量、子宫内膜情况等多种因素均可影响到辅助生殖技术的结果。因此，考虑到本研究样本量的限制其结果不能准确反应所有影响因素对临床妊娠的影响。
　　HTF培养液是一种模拟人输卵管液成分制备的新型培养液，其中含有葡萄糖、丙酮酸钠、乳酸钠、磷酸盐等，其对提高胚胎发育质量有着重要的意义。移植胚胎的质量优良与体外授精-胚胎移植技术有直接关系。移植