2018γ―干扰素释放试验、荧光定量PCR、结核菌素皮肤试验联合检测对

9582673

　　【摘要】 目的：研究γ-干扰素释放试?（IGRA）、荧光定量PCR（FQ-PCR）、结核菌素皮肤试验（TST）三种方法联合检测对涂阴性肺结核的诊断价值。方法：选取确诊的33例涂阴性肺结核和30例非结核的肺部感染患者，分别使用酶联免疫法（ELISA法），测定患者全血干扰素的浓度，荧光定量PCR法检测患者肺泡灌洗液的结核杆菌DNA，卡介菌纯蛋白衍生物（BCG-PPD）进行结核菌素皮肤试验。结果：γ-干扰素释放试验、荧光定量PCR、结核菌素皮肤试验三种检测方法在肺结核组和非肺结核组的阳性率比较，差异均有统计学意义（P http://
　　【关键词】 干扰素释放试验； 荧光定量PCR； 结核菌素试验； 涂阴性肺结核； 诊断价值
　　【Abstract】 Objective：To study the diagnostic value of the combination of interferon gamma release assay （IGRA），fluorescence quantitative PCR （FQ-PCR） and tuberculin skin test （TST） for the diagnosis of smear negative pulmonary tuberculosis.Method：Thirty-three patients diagnosed smear negative pulmonary tuberculosis and 30 cases of no tuberculosis were detected by using three ways，the IGRA was completed by detecting the patient of concentration of blood interferon with using ELISA；mycobacterium tuberculosis DNA was measured in bronchoalveolar lavage fluid by using fluorescent quantitative PCR；the tuberculin skin test was achieved by using Purified Protein Derivative of BCG （BCG-PPD）.Result：The IGRA，FQ-PCR，TST were significant differences in positive rate of pulmonary tuberculosis group and non tuberculosis group（P  　　First-author’s address：The Affiliated Hospital of Jiujiang College，Jiujiang 332000，China
　　doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.33.002
　　我国是全球22个结核病高负担国家之一，结核病发病人数居全球第二位，防治任务艰巨。对于涂阳性肺结核的患者，很容易被诊断并能给予及时抗结核治疗，但是临床上往往存在大量涂阴性肺结核的患者，因无法及时诊断，导致患者病情延误，造成不良后果[1-3]。过去使用结核菌素皮肤试验是临床辅助诊断肺结核的常用方法，但是它的假阳性率较高，导致过度治疗[4-7]。近几年，文献[8-11]报道，γ-干扰素释放试验对诊断肺结核有较高的敏感性和特异性，但是其鉴别肺结核潜伏性感染和活动性感染有一定困难。本研究开展了γ-干扰素释放试验联合肺泡灌洗液荧光定量PCR、结核菌素皮肤试验三种检测手段来评估对涂阴性肺结核的诊断价值。
　　1 资料与方法
　　1.1 一般资料 研究对象为2015年1月-2016年9月因肺部感染在本院呼吸科住院患者。入选标准：（1）年龄18～75岁；（2）临床上有咳嗽、咳痰症状；（3）胸片或胸部CT提示肺部阴影，考虑肺部感染。排除标准：（1）妊娠妇女；（2）意识障碍、严重高血压、心律失常、重度心功能不全患者；（3）排除非感染性肺部疾病如肺水肿、肺部肿瘤、肺栓塞、非感染性肺间质性疾病、肺血管炎等。入选患者被分为两组，试验组即涂阴性肺结核组，诊断标准是按照中国结核病防治规划实施工作指南（2008年版）[12]，涂阴性肺结核诊断标准如下：（1）三次痰涂片阴性，胸部影像学检查显示与活动性肺结核相符的病变（与原发性肺结核、血行播散性肺结核、继发性肺结核、结核性胸膜炎任一种肺结核病变影像学表现相符）且伴有咳嗽、咳痰、咯血等肺结核可疑症状；（2）三次痰涂片阴性，胸部影像学检查显示与活动性肺结核相符的病变且抗结核抗体检查阳性；（3）三次痰涂片阴性，胸部影像学检查显示与活动性肺结核相符的病变且肺外组织病理检查证实为结核病变者；（4）三次痰涂片阴性的疑似肺结核病例经诊断性治疗或随访观察可排除其他肺部疾病者；（5）三次痰涂片阴性，纤维支气管镜灌洗液检出抗酸分枝杆菌；（6）三次痰涂片阴性，支气管或肺部组织病理证实结核病变；符合上述6条诊断标准中1条即可诊断。试验组所有病例均随访3个月，排除非结核性感染性肺病，最终获得确诊，共入选33例患者，其中男23例，女10例，平均年龄（45.0±3.2）岁。对照组为非结核肺部感染组包括社区获得性肺炎、肺癌伴阻塞性肺炎、支气管扩张伴感染、慢性阻塞性肺病伴感染，最终入选30例，
　　其中男20例，女10例，平均年龄（43.0±2.5）岁。两组患者的一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准，所有入选患者均签署知情同意书。
　　1.2 仪器与试剂 γ-干扰素释放试验仪器采用武汉海吉力生物科技有限公司生产的HGNElisa01型全自动酶联免疫工作仪，试剂为武汉海吉力生物科技有限公司研制的结核杆菌特异性细胞免疫反应检测试剂盒，荧光定量PCR法仪器为采用美国Perkin Elmer公司5700全自动PCR分析仪器，试剂采用中山大学达安基因股份有限公司PCR检测试剂盒。结核菌素皮肤试验试剂采用卡介菌纯蛋白衍生物，为北京祥瑞生物制品有限公司生产，国药准字S10960019。
　　1.3 方法
　　1.3.1 γ-干扰素释放试验 采用酶联免疫吸附法检测血中γ-干扰素的浓度，具体操作步骤如下：使用BD肝素锂抗凝采血管抽取入组患者4～5 mL静脉血，轻柔颠倒混匀20次左右，使抗凝剂充分溶解送本院检验科；检验者3 h内将采集的全血分装到3种不同的培养管中，“T”管为添加了结核特异性抗原ESAT-6、CFP-10的测试培养管，“N”管为本底对照培养管，“P”管为添加了非特异刺激原植物凝血素（PHA）的阳性对照培养管，每种培养管分装1 mL血样，分装后轻柔颠倒培养管20次左右，并立刻置于37 ℃培养箱中，静置培养20～24 h后取出，离心收集上清液，然后用采用酶联免疫吸附法定量检测三种管中血上清液中γ-干扰素的浓度，最后根据各管检测的γ-干扰素的浓度来判定是否为结核杆菌感染阳性。具体结果判定的参考值如下：（1）N≤8 IU/mL，P-N任何值，T-N≥0.35 IU/mL并且≥N/4，判定为阳性；
　　（2）N≤8 IU/mL，P-N≥0.5 IU/mL，T-N  　　1.4 统计学处理 统计学处理使用SPSS 18.0统计软件，三种检测方法阳性率结果比较，采用 字2检验，以P  　　参考文献
　　[1] Pai M，Zwerling A，Menzies D.Systematic review：T-cell-basedassays for the diagnosis of lalent tuberculosis infection：an update[J].Ann Intern Med，2008，149（3）：177-184.
　　[2] Ahmad S.New approaches in the diagnosis and treatment of latent tuberculosis infection[J].Respir Res，2010，11（3）：169.
　　[3] Diel R，Goletti D，Ferrara G，et al.Interferon-γ release assays for the diagnosis of latent Mycobacterium tuberculosisinfection：a systematic review and meta-analysis[J].Eur Respir J，2011，37（1）：88-89.
　　[4] Kim S Y，Jung G S，Kim S K，et al.Comparison of the tuberculin skin test and interferon-γ release assay for the diagnosis of latent tuberculosis infection before kidney transplantation[J].Infection，2013，41（1）：103-110.
　　[5] Diel R，Loddenkemper R，Nienhaus A.Evidence-based comparison of commercial interferon-gamma release assays for detecting active TB：a meta analysis[J].Chest，2010，137（4）：952-968.
　　[6]周祖模，金嘉琳，王森，等.全血γ干扰素释放试验在活动性肺结核诊断中的应用[J].中华实验和临床感染病杂志：电子版，2012，6（6）：527-531.
　　[7]?钚骆茫?贾红彦，李琦，等.全血γ干扰素释放试验在菌阴肺结核中诊断价值的临床观察[J].中国临床医生，2013，41（3）：42-45.
　　[8]宋其生，陈秀琴，赵琴.结核菌素纯蛋白衍生物试验净增值与γ-干扰素释放试验在结核病群体感染中的诊断价值[J].中华结核和呼吸杂志，2012，35（9）：669-672.
　　[9]李红，唐神洁，史祥等.全血γ-干扰素释放试验对涂阴肺结核诊断价值的研究[J].中华临床医师杂志：电子版，2012，6（16）：4894-4897.
　　[10]伍仕敏，项杰，周虹，等.γ-干扰素释放试验在肺结核和肺外结核诊断中的应用[J].武汉大学学报：医学版，2013，34（3）：403-406.
　　[11]章淑梦，周毕，符一骐，等.γ-干扰素释放试验在活动性肺结核病的临床价值[J].中华结核与呼吸杂志，2014，37（5）：372-373.
　　[12]卫生部疾控司.中国结核病防治规划实施工作指南[M].北京：中国协和医科大学出版社，2009：26-27.
　　[13]王辰，陈荣昌.呼吸病学[M].2版.北京：人民卫生出版社，2014：110-111.
　　[14]骆宝建，吕平欣.γ-干扰素释放试验在结核病诊断中的应用[J].北京医学，2012，34（9）：840-842.
　　[15] Janssens J P，Roux-Lombard P，Perneger T，et al.Quantitative scoring of an interferon-assay for differentiating active from latent tuberculosis[J].Eur Respir J，2007，30（4）：722-728.
　　[16]李志惠，张红漫，刘建强，等.荧光定量PCR测定支气管肺泡灌洗液中TbDNA诊断肺结核的临床价值[J].中国抗痨杂志，2010，32（10）：634-636.
　　[17]廖明，刘琳，杨明炜.血TSPOT.TB联合肺泡灌洗液TBDNA检测对诊断肺结核的应用价值[J]临床肺科杂志，2014，19（12）：2249-2252.
　　[18]魏巍，覃林珍，刘守江，等.实时荧光聚合酶链反应检测支气管肺泡灌洗液结核分枝杆菌DNA诊断肺结核价值[J].临床荟萃，2014，29（6）：611-613.
　　[19] Fei By，Lv Hx，Zheng W H.Fluorescent quantitative PCR of Mycobacterium tuberculosis for differentiating intestinal tuberculosis from Crohn’s disease[J].Braz J Med Biol Res，2014，47（2）：166-170.
　　[20] Zhao D，Yang X M，Chen Q Y，et al.A modified acid-fast staining method for rapid detection of Mycobacterium tuberculosis[J].J Microbiol Methods，2012，91（1）：128-132.
　　[21]方涛，刘娅，刘亚莉.结核菌素试验在涂阴肺结核患者诊断中的作用[J].重庆医学，2011，40（27）：2707-2708.
　　（收稿日期：2017-10-13） （本文编辑：张爽）