[摘要] 目的 研究FHL1蛋白和FHL1基因在甲状腺癌中的表达及临床意义。 方法 分别应用实时定量PCR、蛋白质杂交检测人甲状腺乳头状癌组织标本及结节性甲状腺肿标本中FHL1基因和蛋白的表达情况。 结果 实时定量PCR提示FHL1基因在结节性甲状腺肿中高表达，在甲状腺乳头状癌中低表达，相对表达量为（0.4538±0.0074），差异有统计学意义（P http://
[关键词] 甲状腺乳头状癌；FHL1基因；FHL1蛋白；抑癌基因
[中图分类号] R736.1 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2017）32-0005-03
[Abstract] Objective To study the expression and clinical signifiance of FHL1 protein and FHL1 gene in thyroid carcinoma. Methods Real-time quantitative PCR and protein hybridization were used to detect the expression of FHL1 gene and protein in papillary thyroid carcinoma specimens and nodular goiter specimens. Results Real-time quantitative PCR indicated that FHL1 gene was highly expressed in nodular goiter， and lowly expressed in papillary thyroid carcinoma. The relative expression amount was（0.4538±0.0074）， which was significant from the statistical analysis（P理学证实，并且取材经过患者及其家属同意，所有标本留取后于30 min内放置于-80℃冰箱保存备用。
主要试剂及仪器：垂直电泳槽及转膜槽、RNA提取试剂盒、Quant cDNA合成试剂盒、兔抗人FHL1抗体、Real Master Mix（SYBR Green）试剂盒、DAB显色试剂盒、Stepone PCR仪。 1.2 方法
1.2.1 实时定量PCR方法 PCR引物序列（FHL1基因）见表1。提取新鲜的甲状腺乳头状癌及结节性甲状腺肿标本各40例，每例样本重约0.2 g，采用Trizol法提取组织中总的RNA，并且测定RNA提取的浓度及纯度，证明提取的RNA完整。cDNA合成（20 μL反应体系）：反应采用20μL反应体系，依据说明书依次加入试剂，在37℃水浴中放置60 min。参照试剂盒说明完成Real-time PCR。
1.2.2 Western-blotting方法 取出新鲜的甲状腺乳头状癌和对照组标本，每组均40例，每例约0.2 g，按照说明书提取组织蛋白，然后测定总蛋白浓度，配置电泳所需的浓缩胶和分离胶，每个小孔的用量是50 μg，基准Marker为5 μL，100 V电泳，继续15 V电压，经过1 h后将胶移至硝基纤维膜上，然后脱脂奶粉脱脂2 h，滴加Ⅰ抗（FHL1抗体浓度1∶1000），置于4℃冰箱过夜，滴加Ⅱ抗（浓度为1∶5000）室温静置1.5 h，滴加发光液。
1.3 观察指标
实时定量PCR观察指标：收集溶解、扩增曲线，然后计算相对表达量；Western-blotting方法?^察指标：暗室内进行曝光显影定影，最后软件分析蛋白浓度灰度。
1.4 统计学方法
使用SPSS16.0软件包对数据进行处理，计数资料采用χ2检验，计量资料采用t检验，P [参考文献]
[1] Sipos JA，Mazzaferri EL. Thyroid cancer epidemiology and prognostic variables[J].Clin Oncol（Rcou Radiol），2010，22（6）：395-404.
[2] Enewold L，Zhu K，Ron E，et al.Rising thyroid cancer incidence in the United States by demographic and tumor characteristics，1980-2005[J].Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2009，18（3）：784-791.
[3] Kweon SS，Shin MH，Chung U，et al.Thymid cancer is the most common cancer in women，based on the data from population-based cancer registries，south Korea[J].Jpn J Clin Oncol，2013，43（10）：1039-1046.
[4] WHO. GLOBOCAN2012：Estimated cancer incidence，mortality and prevalence in 2012[EB/OL].[2013-12-31].http：//globocan.iarc.fr/Pages/fac_sheets_population.aspx.
[5] 任立军，杨廷芳，张成雷.甲状腺乳头状癌淋巴结转移规律的临床研究[J].中国普外基础与临床杂志，2011，（4）：419-422.
[6] 杨雷，孙婷婷，袁延楠，等.1995-2010年北京城区甲状腺癌发病趋势及病理特征分析[J].中华预防医学杂志，2013，47（2）：109-112.
[7] Davies L，Welch HG.Current thyroid cancer trends in the United States[J].JAMA Otolaryngol Head Neck Surg，2014，140（4）：317-322.
[8] Dal Maso L，Lise M，Zambon P，et al.Incidence of thyroid cancer in ltaly，1991-2005： Time trends and age-period-cohort effects[J].Ann Oncol，2011，22（4）：957-963.
[9] Mcgrath MJ，Cottle DL，Nguyen MA，et al.Four and a half LIM protein 1 binds myosin―binding protein C and regulates myosin filament fomaation and sarcomere assembly[J].J Biol Chem，2006，281（11）：7666-7783.
[10] Lin J，Ding L，Jin RJ，et al.Four and a half LIM domains 1（FHL1） and receptor interacting protein of 140kDa（RIP140） interact and cooperate in estrogen signaling[J].Int J Biochem Cell Biol，2009，41（7）：1613-1618.
[11] Rudra D，Zhao Y，Warner JR.Central role of the lfh1p-Fhl1p interaction in the synthesis of yeast ribosomal proteins[J].EMBO J，2005，24（3）：533-542.
[12] Shathasivam T，Kislinger T，Gramolini AO.Genes， proteins and complexes：The multifaceted nature of FHL family proteins in diverse tissues[J].J Cel1 Mol Med，2010，14（12）：2702-2720.
[13] ?茄由?，张仑，王旭东，等.甲状腺乳头状癌预后多因素分析[J].中国肿瘤临床，2007，（22）：1294-1297.
[14] Martin DE，Soulard A，Hall MN.TOR regulates ribosomal protein gene expression via PKA and the Forkhead transcription factor FHL1[J].Cell，2004，119（7）：969-979.
[15] 李治，刘春萍，屈新才，等.乳头状甲状腺癌的颈部淋巴结转移规律与手术方式[J].中国普通外科杂志，2008，（11）：1051-1053.
[16] Shen YQ，Jia ZY，Nagele RG，et al.Srcuses Cas to suppress Fhl1 in order to promote nonanchored growth and migration of tumor cells[J].Cancer Res，2006，66（3）：1543-1552.
[17] Ding L，Niu C，Zheng Y，et al.FHLI interacts with estrogen receptors and regulates breast cancer cell growth[OL]. J Cell Mol Med，2009，Oct 16. [Epub ahead of print]
[18] Bonner AE，Lemon WJ，Devereux TR，et al.Molecular profiling of mouse lung tumors：Association with tumor progression，lung development，and human lung adenoeareinomas[J].Oncogene，2004，23（5）：1166-1176.
[19] 刘哲，许元鸿，龙锦，等.FHL1在人胰腺癌族中的表达及其与胰腺癌的侵袭及转移的相关性研究[J].临床与病理杂志，2015，35（3）：423-427.
[20] 吴成利，周洲，钱建新，等.FHL1在胃癌中的表达及其临床意义[J].临床病理学杂志，2011，16（3）：228-231.
（收稿日期：2017-09-12）
发表于 2018-8-16 20:12:34