2018血浆(1―3)―B―D―葡聚糖在新生儿侵袭性真菌感染中的诊断价值

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　　摘要：目的：探讨血浆（1-3）-B-D-葡聚糖在诊断新生儿侵袭性真菌感染中的临床价值。方法：选择2012年12月至2013年12月确诊为侵袭性真菌感染的新生儿22例作病例组，59例同年龄段非真菌感染新生儿作对照组。采用微生物快速动态检测系统检测两组新生儿血浆（1-3）-B-D-葡聚糖中的含量。以血浆100pg/ml（1-3）-B-D-葡聚糖为界值，分析检测敏感度、特异度。结果：病例组血浆（1-3）-B-D-葡聚糖为（214.8±149.4）pg/ml，高于对照组（67.2±27.1）pg/ml，差异有统计学意义（P http://
　　关键词：（1-3）-B-D-葡聚糖；诊断；新生儿侵袭性真菌感染
　　中图分类号：R446 文献标志码：A 文章编号：1008-2409（2016）01-0042-03
　　新生儿侵袭性真菌感染（neonatal invasive fungal infeetions，N1FI）是指侵袭新生儿深部组织、内脏和全身的真菌感染，包括深部组织感染及真菌血症，临床表现无明显特征，具有诊断困难、病情凶险、治疗周期长、病死率高等特点。由于传统的真菌培养阳性率低、耗时较长，加之新生儿采血困难等原因，致使新生儿侵袭性真菌感染的早期诊断极为困难。血浆（1-3）-B-D-葡聚糖检测也叫G试验，其原理是利用真菌细胞壁（1-3）-B-D-葡聚糖能够特异性地激活酶促凝集系统，使反应溶液的透光度发生变化。这是目前临床上常用的快捷辅助早期诊断真菌的方法。因此，检测血浆中（I-3）-B-D-葡聚糖的含量对侵袭性真菌感染患者的早期诊断具有重要意义。笔者通过分析桂林医学院附属医院新生儿患者血浆（1-3）-B-D-葡聚糖，探讨血浆（1-3）-B-D-葡聚糖在诊断新生儿侵袭性真菌感染中的临床价值。
　　1.资料与方法
　　1.1病例选择
　　根据儿童侵袭性肺部真菌感染诊疗指南（2009版），儿童侵袭性真菌感染的诊断分为确诊和临床诊断，确诊指宿主因素+临床证据+肺组织病理学和（或）有确诊意义的微生物学证据；临床诊断指宿主因素+临床证据+有临床诊断意义的微生物学证据。本研究中的新生儿是指胎儿娩出母体并自脐带结扎起，至出生后满28d。2012年12月至2013年12月我院新生儿科诊治的真菌感染患儿（包括确诊和临床诊断患儿）共22例，同期非真菌感染患儿59例为对照组，病例组男15例，女7例，出生体重0.96～4.28kg，平均（2.54±1.13）kg；对照组男38例，女21例，出生体重（1.05～4.54）kg，平均（2.74±0.91）kg。两组患者性别体重等基本资料差异无统计学意义。
　　1.2方法
　　1.2.1标本采集 使用不含B-D-葡聚糖的采血管采集空腹新生儿的静脉血1 ml，4 000 r/min离心10 min，取上清0.1 ml，加入0.9m1的样品处理液中，混匀后置于75℃恒温仪10 min，将血浆中的葡聚糖裂解出来，然后取出冷却至室温，待测。
　　1.2.2血浆（1-3）-B-D-葡聚糖检测
　　使用湛江安度斯生物有限公司的真菌（1-3）-B-D-葡聚糖检测试剂盒，于微生物快速动态检测系统测定（1-3）-B-D-葡聚糖。检测按照试剂盒操作说明进行，操作过程中严格执行无菌操作。
　　1.3数据统计分析
　　以100 pg/ml为界值，分析血浆（1-3）-B-D-葡聚糖检测真菌感染的敏感度和特异度。两组计量资料间的比较采用t检验，检验水准a=0.05，P100pg/ml为界值，血浆（1-3）-B-D-葡聚糖诊断NIFI的敏感度为81.8%，特异度为83.1%。
　　3.讨论
　　（1-3）-B-D-葡聚糖广泛存在于不包括结合菌和隐球菌以外的大多数真菌细胞壁中，原核生物、病毒和人体细胞中均不含有这种多聚糖。深部真菌感染时，真菌进入人体及深部组织，在体内经吞噬细胞处理后，（1-3）-B-D-葡聚糖从细胞壁中释放出来，进入血液及其他体液中（如尿液、脑脊液、腹水等）。新生儿时期的大多数真菌感染是由白色念珠菌及近平滑假丝酵母菌引起的，而（1-3）-B-D-葡聚糖检测对念珠菌及曲霉菌感染十分敏感。国内报道采用微生物快速动态检测系统测定（1-3）-B-D-葡聚糖，此方法特异性和敏感性可因设定的阳性临界值不同而不同，其阳性临界值的设定也一直在讨论中，目前采用较多的是20 pg/ml及50 pg/ml。我院检验科以100 pg/ml为临界值，在不显著降低检测灵敏度度的同时提高了特异性，避免过多假阳性结果的出现。当检查结果在100～150 pg/ml之间，考虑为感染初期，应连续检测，高于150 pg/ml可能为念珠菌、曲霉菌或肺孢子菌深部感染。多种因素可以导致（1-3）-B-D-葡聚糖出现假阳性，因此新生儿在做（1-3）-B-D-葡聚糖前，尽可能考虑影响因素，避免假阳性的出现，比如，错开使用丙种球蛋白、免疫球蛋白、全静脉营养液的时间。如果发现结果超过正常值，应结合患儿基础疾病及用药情况综合分析。有些情况下可能导致假阴性，例如一些特殊真菌如接合菌、毛霉菌、根霉菌等真菌细胞壁没有（1-3）-B-D葡聚糖成分，隐球菌细胞壁外有荚膜致使（1-3）-B-D葡聚糖释放不出，这些真菌感染会漏诊。另外标本存放时间过长会导致葡聚糖分解，也会造成假阴性。因此对于结果阴性的患儿应综合分析，必要时采用其他方法重复检测。
　　血浆（1-3）-B-D-葡聚糖检测用于诊断新生儿侵袭性真菌感染具有获取标本方便、快速、简便等特点，可作为传统的真菌涂片、培养法及组织病理学法等实验室诊断方法的补充，这对减少错诊、漏诊有积极的作用。