2018雷公藤红素联合TRAIL对骨肉瘤细胞增殖的影响

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　　摘要：目的：探讨雷公藤红素联合TRML对人骨肉瘤细胞增殖的影响。方法：雷公藤红素和TRAlL孵育人骨肉瘤U20s细胞24 h后，采用MTr法分析人骨肉瘤U20s细胞的增殖活性，相差显微镜下观察细胞的形态学改变。结果：0.25 mol/L的雷公藤红素和25 ng/ml的TRAIL联合作用于人骨肉瘤U20s细胞24 h后，骨肉瘤细胞增殖的抑制率为36，47%，明显高于单用雷公藤红素14.26%以及单用TRAIL 18.97%，差异有统计学意义（P http://
　　关键词：TRAIL；雷公藤红素；骨肉瘤细胞
　　中图分类号：R781.3 文献标志码：A 文章编号：1008-2409（2016）01-0052-04
　　肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNF related apoptosis inducingligand，TRAIL）是肿瘤坏死因子家族的成员，它能诱导肿瘤细胞凋亡，而对正常细胞无毒性作用。但骨肉瘤细胞对TRAIL的敏感性低。近年来报道，从雷公藤的根皮中提取出来的雷公藤红素（celastrol）促进TRAIL杀伤肿瘤细胞。本研究将人骨肉瘤细胞经过雷公藤红素预处理后，再用TRAIL孵育，分析两者联合对骨髓瘤细胞的抑制作用。
　　1.材料与方法
　　1.1材料和试剂
　　人骨肉瘤细胞株U20S购自中国科学院上海生科院细胞资源中心。胎牛血清购自上海依科赛生物制品有限公司。DMEM高糖培养基和胰蛋白酶均为Gib-co公司产品。人重组可溶性TRAIL购自美国BioVi-sion公司。雷公藤红素（celastrol）购自美国Selleck Chemicals公司。四甲基偶氮唑盐（MTT）购自上海生物工程技术公司。
　　1.2细胞培养
　　将人骨肉瘤细胞株U20S置于含10%胎牛血清的高糖DMEM培养液（含青霉素和链霉素各100ug/ml）中，用T12.5的培养瓶传代，在37℃、5%CO2饱和湿度的培养箱中孵育。
　　1.3实验分组
　　实验设雷公藤红素组、TRML组、雷公藤红素+TRAIL组和不加药的对照组。雷公藤红素浓度0.25I]mol，TRAIL浓度25 ng/ml，雷公藤红素+TRAIL合用组0.25 Dmol/1的雷公藤红素和25 ng/ml的TRAIL。
　　1.4给药方式
　　单独用药组可以种96孔板，待细胞全贴壁后直接给药。因雷公藤红素和TRAIL不能直接同时给药，须按照文献的预处理给药方式。取生长状态良好的人骨肉瘤细胞株U20S，接种于T12.5培养瓶中。待瓶中细胞贴壁至80%左右时，加人0.25 umol/L的雷公藤红素孵育12 h后，用PBS洗3遍，培养瓶中留下的贴壁细胞再种于96孑L板，待96孔板细胞贴壁后再加入25 ng/m1的TRAIL作用24 h后测OD值。
　　1.5MTT法分析细胞增殖
　　骨肉瘤U20S细胞按每孔8 000个细胞接种于96孔板。每孔加入100ul培养基，在37℃、5%CO2饱和湿度的培养箱过夜。待细胞贴壁后弃上清，各孔按设计加入含不同浓度雷公藤红素或者TRAIL的细胞培养基，每孔100ul，每个浓度设6个复孔。培养24 h后，每孔直接加入20ul新配制的5 mg/ml的MTT溶液，37 ℃继续避光孵育4 h，然后吸出上清液，加入150ul的二甲基亚砜（DMSO）溶解，混匀15 min后，在490nm波长分别测定吸光度值。肿瘤细胞抑制率（%）=（1-实验组OD值/对照组OD值）×100%。
　　1.6倒置相差显微镜下观察细胞形态
　　细胞加药孵育24 h后，于倒置相差显微镜下观察细胞的生物学特征和形态学改变。
　　1.7统计学方法
　　实验数据以（x±s）表示，采用SPSS 18.0统计软件分析，以P