[摘要] 目的 探讨Rcan2在结直肠癌组织中的表达及与临床病理的相互关系。 方法 方便收集该院2012年 1 月― 2017 年 1月期间诊治的炎症性肠病20 例、增生性息肉20例、腺瘤40 例、结直肠癌及其癌旁正常组织80 例，获取标本总RNA，q PCR测定 Rcan2 mRNA 表达水平，对Rcan2 mRNA的差异表达与结直肠癌患者临床病理信息进行相关性分析。体外转染Rcan2基因于结直肠癌colo320DM细胞，MTT实验观察Rcan2?^表达对肿瘤细胞增殖的影响。体外转染kras突变基因（G12V）于人结直肠癌细胞中，观察Rcan2基因的表达情况。 结果 结直肠癌组织中Rcan2 mRNA表达量（2.98±0.21）明显高于其他各组。Rcan2 mRNA的表达量与肿瘤大小密切相关 （P /6/view-10743246.htm
[关键词] Rcan2；实时荧光定量PCR；结直肠癌； mRNA
[中图分类号] R446.1；R730.23 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）08（a）-0005-03
[Abstracts] Objective This paper tries to investigate the expression of Rcan2 in colorectal cancer and its relationship with clinicopathological features. Methods Convenient selection 20 patients with inflammatory bowel disease， 20 cases of hyperplastic polyps， 40 cases of adenoma， 80 cases of colorectal cancer and adjacent normal tissues from January 2012 to January 2017 in this hospital were collected. The total RNA， the expression of Rcan2 mRNA was measured by qPCR， and the difference of Rcan2 mRNA expression was correlated with the clinicopathological information of patients with colorectal cancer. The effect of Rcan2 overexpression on tumor cell proliferation was observed by MTT assay in colorectal cancer colorectal cancer cells transfected with Rcan2 gene in vitro. In vitro transfection of kras mutant gene（G12V） in human colorectal cancer cells， the expression of Rcan2 gene was observed. Results The expression of Rcan2 mRNA in colorectal cancer tissues was （2.98±0.21）， significantly higher than that in other groups. The expression of Rcan2 mRNA was closely related to tumor size （P 1 资料与方法
1.1 一般资料
收集该院胃肠外科手术标本，包括腺瘤40 例、炎症性肠病20 例、增生性息肉20例、结直肠癌及其癌旁正常组织80例。以上组织，一份用于RNA的提取，一份做病理检查。病理分期参照第 7 版UICC/AJCC 结直肠癌 TNM 分期标准。结直肠癌患者：年龄30～ 90 岁，中位年龄 60 岁，男46例，女 34 例，肿瘤大小 统计学软件进行分析，计数资料采用百分率（%）表示，并采用χ2检验，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，并采用t检验，P0.05），结直肠癌组织中Rcan2mRN4表达量（2.98±0.21）明显高于其他各组（图1）。
2.2 RCNA2 mRNA表达量与结直肠癌标本临床病理特征的关系
如表1 显示，肿瘤大小与结直肠癌组织中Rcan2 mRNA表达量显著相关（ P0.05）。
2.3 Rcan2过表达抑制肿瘤细胞的增值
为了确定Rcan2对肿瘤细胞增值的影响，该研究将Rcan2-pcdna3.1，空载转入colo320DM细胞，培养72 h观察。MTT 法检测细胞的增殖能力，如图2所示，与空载转染的细胞相比，Rcan2-pcdna3.1转染的细胞增长速度相对较慢，这意味着过表达Rcan2对对细胞的增殖能力起到抑制作用。Rcan2-pcdna3.1转染的细胞增长速度慢，OD值从10上升到14，而pcdna3.1转染的细胞增长速度快，OD值从12上升到18 ，过表达kras（G12V）抑制Rcan2基因表?_。Rcan2相对表达量从2.8下降到1.1。
2.4 kras突变抑制Rcan2基因表达
大约40%的结直肠癌存在kras基因的突变，为了解kras突变对Rcan2表达量的影响，该研究将krasG12V-pcdna3.1与空载pcdna3.1分别转染colo320DM细胞。培养48 h，提取总RNA。荧光定量pcr检测Rcan2 mRNA表达量。如图4所示，与转染krasG12V-pcdna3.1组相比，空载组Rcan2表达量更高（P 西妥昔单抗和帕尼单抗作为表皮生长因子受体抗体药物，用于治疗转移性结直肠癌，EGFR作为跨膜酪氨酸激酶受体家族成员，激活RAS-Raf-MAP激酶通路，从而控制细胞的生长、分化和增殖在RAS-Raf-MAP激酶通路中KRAS突变已被报道在是抗EGFR抗体治疗的一个重要的预测指标，因此了解kras的状态与下游分子的相互关系对靶向药物的治疗尤为重要，该次研究发现将kras转染结直肠癌细胞colo320DM，Rcan2的表达量下调，这是否意味着Rcan2参与了耐药机制，或者说Rcan2可能作为潜在的治疗靶点这值得进一步研究[10-11]。
综上所述，该研究结果显示，Rcan2在结直肠癌组织中呈高表达，Rcan2的高表达抑制肿瘤细胞增值，并与肿瘤大小密切相关，此外，进一步研究证实KRAS突变与Rcan2相互关系，揭示了Rcan2可能是一个潜在的治疗靶点。
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（收稿日期：2017-05-08）
发表于 2018-8-15 12:01:15