2018HPLC-ELSD法测定血府逐瘀口服液中苦杏仁苷的效果观察

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　血府逐瘀口服液是一种中药复合制剂，是由十一味中药组成的，包括桃仁、川芎、地黄、红花、牛膝、桔梗、甘草、柴胡、枳壳、当归、赤芍。其主要作用是活血化瘀，行气止痛[1]。可用于治疗瘀血、头痛、胸痛、失眠、瞀闷、心悸等临床症状。近期研究发现，桃仁及其有效成分苦杏仁苷具有同样的药理作用。为了有效地控制该制剂的质量，笔者采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法（HPLC-ELSD）测定了血府逐瘀口服液中苦杏仁苷的含量。
　　资料与方法
　　仪器：日本岛津LC-10A高效液相色谱仪，N2100液相色谱工作站，Alltech 2000ES型蒸发光散射检测器。
　　药品与试剂：血府逐瘀口服液（批号：120101～120110十批次）；苦杏仁苷对照品（批号：110820～220403）；甲醇为色谱纯；其他试剂都是分析纯；水是超纯水。
　　方法：①色谱条件与系统适用性试验：Diamonsil C18色谱柱，其规格为250mm4.6mm，5；流动相为甲醇-水（25：75），流速1.0ml/分，其中检测采用蒸发光散射检测器，漂移管温度控制在105℃，空气或氮气作为雾化气体，其流速控制在3.0L/分。在理论上来说，应该按照苦杏仁苷峰值来计算板数，其板数不应该低于3000[2]。②溶液的制备：对照品溶液的制备：对苦杏仁苷对照品进行精密称取适量，将对照品放入棕色瓶中，然后加入甲醇，制造成对照品溶液，其中每1ml对照品溶液中，含0.2mg苦杏仁苷[3]。供试品溶液的制备：取本品0.4g研细，精密称定，置索氏提取器中，加石油醚（60～90℃）适量，加热回流2小时，弃去乙醚液，药渣挥去乙醚，置索氏提取器中，再加甲醇适量，加热回流5小时，提取液浓缩，转移至25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得出结果。阴性对照液干扰试验：为进一步考查实验设计过程以及测定样品中苦杏仁苷方法及合理性，取10l的不含苦杏仁苷的阴性对照液，将阴性对照液注入高效液相色谱仪，进行测定，得出结果。测定法：精密吸取5l、15l的对照品溶液，10l的供试品溶液，然后将其注入高效液相色谱仪，进行测定，得出结果，然后用外标二点法对数方程进行计算[4]。③线性关系考察：精密吸取对照品溶液各4l、8l、12l、16l、20l，然后将它们注入色谱仪，按照同样的方法进行测定。采用线性回归进行计算，其中纵坐标为峰面积的自然对数，横坐标为苦杏仁苷进样量的自然对数，回归方程：Y=6.2303+1.2026X。④精密度试验：精密吸取10l供试品溶液，然后注入高效液相色谱仪，连续注入5次，对每次的峰面积进行测量，然后计算RSD值。⑤稳定性试验：精密吸取同一批号的供试品溶液，然后注入高效液相色谱仪，每隔2小时进样一次，按上述的含量测定方法进行测定，对峰面积进行测量，计算RSD值。⑥重现性试验：精密吸取同一批号样品，注入高效液相色谱仪，多次进行测定，计算RSD[5]。⑦回收率试验：采用加样回收法，分别精密取得已知含量的样品和一定量对照品溶液，一共取得6份，将样品加入对照品溶液中，然后进行测定。⑧样品含量测定：采用确定的方法对10个批号的样品进行测定，得出样品含量[6]。
　结果
　　阴性对照液干扰试验结果表明，在苦杏仁苷色谱峰的保留时间处，阴性对照液的色谱图没有出现干扰峰。测定法结果，见表1。
　　根据以上结果，暂定桃仁药材按干燥品计算，含苦杏仁苷（C20H27NO11）不得1.8%。
　　线性关系考察：r=0.9995，结果表明，在0.856～4.28g范围内，苦杏仁苷进样量的自然对数与峰面积的自然对数之间，具有较好的线性关系。精密度实验：RSD=0.87%（n=5），结果表明测定仪器的精密度良好。稳定性实验：RSD= 0.92%（n=5）。重现性实验：RSD=1.19%（n=5），结果表明方法重现性良好。回收率试验结果，见表2。
　　样品含量测定结果，见表3。
　　讨论
　　苦杏仁苷的测定方法有3种，分别为滴定法、色谱法及分光光度法。中药复方制剂的成分非常复杂，为了对其中成分的含量进行有效测定，通过使用紫外检测器，采用高效液相色谱法。苦杏仁苷容易在沸水、乙醇中微溶，检测波长为210nm，由于这些理化性质的限制，导致样品中的苦杏仁苷无法分离出来，从而造成供试品中阴性液对照液干扰实验为阳性，得出的结果不准确。而采用蒸发光散射检测器对成分的含量进行检测，供试品中苦杏仁苷色谱峰完全达到基线分离，阴性液对照液干扰实验为阴性，表示无干扰，且其色谱峰有较高的相应信号[7]。本研究结果表明，采用本方法测定苦杏仁苷含量，具有较好重现性、稳定性和精密度，值得推广，该方法一种血府逐瘀口服液的质量控制方法已经取得授权专利。
　　根据ELSD的原理，样品质量与检测器相应之间是一种指数的关系，而经过对数转换运算，两者之间呈线性关系，具有特定的线性方程式，其截距非零。对含量进行计算是，采用外标二点法对数方程，这样可以减少实验误差。在本研究中就采取了同样的方法，采用线性回归计算，苦杏仁苷进样量的自然对数与峰面积的自然对数之间，具有较好的线性关系；为了得到更加准确的结果，可以在线性范围内，采用对照品溶液二点法校正和含量计算。
　　参考文献
　　1王世祥，王晓雯，高志娟，等.HPLC法测定活血胶囊中芍药苷、苦杏仁苷、川芎嗪和阿魏酸[J].中成药，2011，33（4）：619.
　　2邹小娟，谢和兵，钱芳，等.HPLC法测定苦杏仁中苦杏仁苷含量的方法研究[J].中国药事，2009，23（1）：33.
　　3李翔，马建丽，周亮，等.HPLC法测定麻杏口服液中苦杏仁苷的含量[J].解放军药学学报，2013，29（1）：57.
　　4覃丽郦，熊佐章.RP-HPLC法测定复方百部止咳糖浆中苦杏仁苷的含量[J].中国药事， 2009，23（6）：573.
　　5霍琳，陈晓辉，王鹏，等.RP-HPLC法测定郁李仁中苦杏仁苷含量[J].药物分析杂志，2009， 29（12）：2055.