[摘要] 目的 ?^察玉屏风散合四物汤对慢性阻塞性肺病（COPD）大鼠气道肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌、链球菌、奈瑟菌、乳酸杆菌的影响作用，为玉屏风散合四物汤治疗COPD提供一定的实验依据。 方法 按随机数字表将50只SPF级雄性Wistar大鼠分为正常组，模型组，玉屏风散合四物汤高、中、低剂量组，每组各10只。通过气管滴注脂多糖加烟熏的方法建立COPD大鼠模型。造模结束后，给药组分别给予不同浓度玉屏风散合四物汤灌胃，正常组和模型组以无菌蒸馏水灌胃，每日1次，连续30 d。收集所有大鼠肺组织匀浆进行各种细菌的高通量测序检测，取左肺组织制作病理切片。 结果 ①与正常组相比，模型组乳酸杆菌含量显著降低，其余6种细菌含量均显著升高，差异有统计学意义（P 0.05）；③与模型组相比，玉屏风散合四物汤低、中剂量组的乳酸杆菌含量显著升高，差异有统计学意义（P 0.05）。 结论 玉屏风散合四物汤可使COPD大鼠肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌、链球菌、奈瑟菌含量明显减少，乳酸杆菌含量增多，这可能是其治疗COPD的重要机制之一。
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[关键词] 玉屏风散；四物汤；慢性阻塞性肺疾病；细菌
[中图分类号] R563 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）11（c）-0013-04
Effects of Yupingfeng San and Siwu Decoction on seven kinds of bacteria in rats with chronic obstructive pulmonary disease
PENG Jing YANG Zhongshan LI Yuqing YUAN Jiali
Basic Medical College， Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Yunnan Province， Kunming 650500， China
[Abstract] Objective To observe the effect of Yupingfeng San and Siwu Decoction on Klebsiella pneumoniae， Pseudomonas aeruginosa， Haemophilus influenzae， Enterobacter， Streptococcus， Neisseria and Lactobacillus in rats with chronic obstructive pulmonary disease （COPD）， in order to provide experimental basis for Yupingfeng San and Siwu Decoction in the treatment of COPD. Methods Fifty SPF male wistar rats were divided into 5 groups， incliding normal group， model group， Yupingfeng San and Siwu Decoction high dose， middle dose and low dose groups， with 10 cases in each group. The COPD rat model was established by intratracheal instillation of lipopolysaccharide plus smoked methods. After molding， the rats in the dose groups were given to different concentrations of Yupingfeng San and Siwu Decoction by gavage， while the rats in the normal group and model group were fed with sterile distilled water， once time a day for 30 days. All the lung tissues of rats were collected， to for high-throughput sequencing of various bacteria， and the left lung tissue was used to make pathological sections. Results ①Compared with the normal group， the content of Lactobacillus in the model group was significantly decreased， and the contents of the other six bacteria were significantly increased， with statistically significant difference （P 0.05）.③The contents of Lactobacillus in the Yupingfeng San and Siwu Decoction low and middle dose groups was significantly increased， compared with model group， with statistically significant difference （P [Key words] Yupingfeng San； Siwu Decoction； Chronic obstructive pulmonary disease； Bacterial
慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是常见的呼吸系统疾病，严重危害患者的身心健康，其气流受限不完全可逆、呈进行性发展，与肺对吸入烟草烟雾等有害气体或颗粒的异常炎性反应有关[1]。很多研究表明，细菌定植与COPD的发病及加重密切相关，有效控制细菌感染是治疗COPD的重要手段之一[2-4]。
玉屏风散为中药免疫调节剂，具有益气固表止汗之效[5-8]，四物汤是活血养血法的经典方剂，功效养血调血，主治营血虚滞证[9-11]。两方合用则有“益气活血养血”之效，经临床治疗300余例COPD，显效率为80%以上。因此本实验选定玉屏风散合四物汤干预COPD大鼠气道7种常见细菌，观察其影响效果，分析其治疗COPD的可能机制。
1 材料与方法
1.1 动物与药材
50只雄性SPF级Wistar大鼠，6～8周，平均体重（200±20）g，购于成都达硕生物科技有限公司[动物许可证号SCXK（川）2015-030]，饲养于云南中医学院（以下简称“我校”）实验动物中心。玉屏风散合四物汤（黄芪、白术、防风、熟地、当归、白芍、川芎7味中药组成），均购自云南鸿翔中药科技有限公司（生产批号：20160803），由我校中药鉴定教研室鉴定其品种和质量。全方生药总量122 g，以成人每日治疗剂量根据大鼠体表面积换算为其等效剂量[10.98 g/（kg?d）]，此剂量作为中剂量组，低、中、高剂量的比例为0.5∶1∶3。
1.2 试剂及仪器
红塔山牌香烟（烟碱量1.1 mg/支，焦油量11 mg/支，一氧化碳量11 mg/支，云南玉溪卷烟厂生产），脂多糖（LPS，10 mg/支，Sigma公司），石蜡切片机（Leica RM2235，德国徕卡），摊片机（Leica HI1210，德国徕卡），显微镜（CI-L型，日本尼康）。
1.3 动物分组及模型制备
SPF级雄性Wistar大鼠普通饮食、饮水，适应性饲养1周后，按随机数字表分为5组，每组各10只，分别为正常组，模型组和玉屏风散合四物汤高、中、低剂量组。除正常组外，其余4组分别于第1、14日向各实验组大鼠（10%水合氯醛腹腔注射麻醉）气管内注入脂多糖200 μL，第2～28天（注射LPS当天除外）上午将大鼠置入自制密闭的有机玻璃箱内，注入5%（V/V） 红塔山牌香烟烟雾，30 min /d，共28 d（4周）。正常?M不予烟熏，但采用相同的方法气管内滴入等量的生理盐水。
1.4 给药方法
造模结束后，每日灌胃给药1次，连续给药30 d。正常组和模型组以无菌蒸馏水灌胃。
1.5 指标检测
给药结束后的第2天杀鼠取材，无菌条件下取出右肺放入液氮冻存备用，所有标本均用肺组织匀浆进行各种细菌的高通量测序检测，取其左肺组织制作病理切片。
1.6 统计学方法
采用SPSS 22.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P 0.05）；与模型组相比，玉屏风散合四物汤低、中剂量组的乳酸杆菌含量显著升高，差异有统计学意义（P 0.05）。见表1。
3 讨论
细菌负荷增高可以导致COPD慢性气道炎症加重，因此，降低细菌的定植量能有效缓解COPD的炎症程度。本实验选取的肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和流感嗜血杆菌属于COPD检出率较高的病原菌。赵淑敏等[12]收取了278例COPD合并肺部感染患者的痰液，观察细菌培养及药物敏感性，结果显示COPD合并肺部感染主要为铜绿假单胞菌（22.13%）、肠杆菌属（14.50%）、流感嗜血杆菌（13.74%）、肺炎克雷伯杆菌（12.21%）等革兰阴性杆菌。
肠杆菌属是革兰阴性菌，广泛分布于自然界，普遍存在于人和动物中。最常见的两种是产气肠杆菌和阴沟肠杆菌，能引起多种肠道外的条件致病性感染，如泌尿道、呼吸道和伤口感染，亦可引起菌血症和脑膜炎[13]。
医学上重要的链球菌主要有化脓性链球菌、草绿色链球菌、肺炎链球菌、无乳链球菌等，其中，与COPD密切相关的主要是肺炎链球菌，许多文献报道COPD患者肺炎链球菌检出率明显增高[14-15]。 奈瑟菌属包括脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、干燥奈瑟菌、微黄奈瑟菌、浅黄奈瑟菌、黏液奈瑟菌等。易旭等[16]的研究表明，奈瑟菌在抗菌药物治疗过程中被筛选，从而成为患者呼吸道感染的主要致病菌。
乳酸杆菌是一群生活在机体内益于宿主健康的微生物，它维护人体健康和调节免疫功能的作用已被广泛认可。该类细菌绝大多数对动物和人无毒、无害，负担着动物体内重要的生理功能。
玉屏风散由黄芪、白术、防风组成。黄芪多糖是黄芪的主要生物活性成分，其对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、沙门菌和绿脓杆制有抑菌作用[17]。白术、防风具有抑制星形奴卡菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎链球菌等的作用[18-19]。四物汤包括熟地、当归、川芎、白芍，全方及组方对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、链球菌均有较强的抑制作用[20]。
本实验结果显示模型组肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、肠杆菌、链球菌、奈瑟菌的含量均显著升高，而乳酸杆菌含量显著降低，说明在COPD状态下发生了一定程度的菌群紊乱，应用玉屏风散合四物汤干预后能有效降低6种细菌的含量，对乳酸杆菌则有升高作用，说明此方减轻了这6种病原菌的定植程度，并提升了益生菌的含量，使之能发挥拮抗病原微生物、调节免疫等益生性能，这可能是其治疗COPD的作用机制之一。
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（收稿日期：2017-09-15 本文编辑：李岳泽）
发表于 2018-8-17 09:39:23