[摘要] 目的 ?z测膀胱尿路上皮癌（BUC）组织中DNA甲基转移酶1（DNMT1）、高迁移率族蛋白A2（HMGA2）的表达情况，并探讨其临床意义。 方法 2010年1月～2012年6月在西安医学院附属宝鸡医院泌尿外科收集BUC癌组织89例和正常膀胱组织45例，免疫组化SP法检测各组织中DNMT1、HMGA2蛋白的表达，分析DNMT1、HMGA2蛋白表达与BUC患者临床病理参数及预后的关系。 结果 DNMT1蛋白在BUC癌组织和正常膀胱组织中的阳性表达率分别为70.79%（63/89）和6.67%（3/45），差异有统计学意义（P http://
[关键词] 膀胱尿路上皮癌；DNA甲基转移酶1；高迁移率族蛋白A2；病理参数；预后
[中图分类号] R737.14；R737.15 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）11（c）-0078-04
Expression of DNMT1 and HMGA2 in the bladder urothelial carcinoma tissues and their clinical significance
WEI Fukui WANG Yaofeng
Department of Urology Surgery， Baoji Affiliated Hospital of Xi'an Medical University， Shaanxi Province， Baoji 721006， China
[Abstract] Objective To detect the protein expressions of the DNA methyltransferase 1 （DNMT1） and high mobility group protein A2 （HMGA2） in the bladder urothelial carcinoma （BUC） tissues and to investigate their clinical significance. Methods From January 2010 to June 2012， 89 cases of BUC cancer tissues and 45 cases of normal bladder tissues were collected from Department of Urology Surgery of Baoji Affiliated Hospital of Xi'an Medical University. The immunohistochemical SP method was used to detect the protein expression of DNMT1 and HMGA2 in each tissue. In addition， the relationship between the protein expression of DNMT1/HMGA2 and the clinical pathologic characteristics and prognosis was analyzed. Results The positive expression rate of DNMT1 in BUC cancer tissues and normal bladder tissues was 70.79% （63/89） and 6.67% （3/45）， respectively （P [Key words] Bladder urothelial carcinoma； DNA methyltransferase 1； High mobility group protein A2； Pathological characteristics； Prognosis
表观遗传不稳定性在肿瘤形成和恶性进展中扮演着重要的角色[1]，表观遗传的调节机制主要有DNA甲基化、组蛋白修饰（组蛋白甲基化、去乙酰化等）、RNA编辑等[2]。DNA甲基化是在DNA转移酶（DNMTs）的催化下完成的，DNMTs主要有3种，即DNMT1、DNMT3a和DNMT3b，其中DNMT1主要参与维持DNA的甲基化状态，DNMT3a和DNMT3b在DNA甲基化的重头合成过程中发挥作用[3]。研究表明，DNMT1在包括膀胱癌等多种肿瘤细胞中表达增加[4]。
高迁移率族蛋白（HMG）是在真核生物中广泛存在的一类染色质相关蛋白，主要包括HMGA、HMGB和HMGN等家族成员，HMGA2属于HMGA亚家族，是一种建筑转录因子，在细胞的多种生理过程中发挥作用，如细胞增殖、分化以及细胞周期等[5]。HMGA2在胚胎期及分化程度低的组织中大量表达，而在分化程度高的组织中，几乎不表达[6]。大量研究证实，HMGA2在多种肿瘤细胞中呈现高表达状态，如肺癌[7]、乳腺癌[8]和胰腺癌[9]等。有文献报道，膀胱癌细胞中存在HMGA2转录和翻译水平的表达增加，且HMGA2表达是膀胱癌复发和恶性进展的潜在预测靶标[10]。
本研究采用免疫组化SP法检测DNMT1和HMGA2蛋白在膀胱尿路上皮癌（BUC）组织及正常膀胱组织中的表达情况，并分析DNMT1和HMGA2蛋白表达与BUC患者临床病理参数、预后的关系，探讨其与BUC肿瘤发生及恶性进展的关系，以期为BUC患者的临床诊断和治疗提供理论基础。
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择2010年1月～2012年6月西安医学院附属宝鸡医院接受手术治疗的BUC患者89例，其中男34例，女55例；年龄≤50岁患者23例，>50岁患者66例；肿瘤直径>3 cm者63例，≤3 cm者26例；肿瘤低分化者54例，中高分化者35例；有淋巴结转移71例，无淋巴结转移18例；TNM分期Ⅰ+Ⅱ期25例，Ⅲ+Ⅳ期64例。纳入标准：具有完整的病例资料，且均行膀胱全切术，签署知情同意书，病理诊断为BUC。排除标准：合并其他恶性肿瘤、全身感染性疾病、肝肾疾病。另收集45例正常膀胱组织作为对照组。本研究经医院伦理委员会审核同意。
1.2 试剂与方法
兔抗人DNMT1多克隆抗体（美国Santa公司），兔抗人HMGA2多克隆抗体（美国Santa公司），抗体稀释度均为1∶100；生物素二抗（南京金斯瑞生物科技有限公司），稀释比1∶200；超敏SP试剂盒，DAB显色试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司），苏木精染液（南京赛泓瑞生物科技有限公司）。
所有组织样本经10%甲醛固定，石蜡包埋，按5 μm厚切片；经二甲苯脱蜡，在100%、95%、85%的酒精浸泡水化，在98℃的枸橼酸钠溶液（0.01 mol/L，pH 6.0）中浸泡15 min进行抗原修复，滴加正常山羊血清室温封闭15 min，弃去血清，分别滴加DNMT1和HMGA2一抗工作液，37℃孵育2 h，PBS洗涤3次，每次5 min，滴加生物素二抗，室温孵育30 min，PBS洗涤3次，每次5 min，DAB显色，充分冲洗后，苏木精复染，常规脱水，透明，干燥，封片。以PBS替代一抗作阴性对照。
1.3 结果判定
每例标本均选择10个含有阳性细胞的高倍视野（400×）分别计数100个肿瘤细胞，取其平均值计算阳性细胞百分率。按阳性细胞百分率判定：无阳性细胞为0分；≤25%为1分；>25%～50%为2分；>50%为3分。按染色程度判定：无阳性着色为0分，浅黄色为1分，深黄色为2分，棕黄色为3分。染色指数为阳性细胞百分率与染色强度之和：最小值0分，最大值6分。>3分判定为阳性，≤3分定为阴性。
1.4 随访
采用电话或者门诊的方式进行随访。随访时间为患者确诊后1～60个月，直至患者死亡或者随访时间截止。
1.5 统计学方法
所有数据均采用SPSS 13.0统计软件进行?y计学分析，计数资料比较采用χ2检验。以P 0.05），与患者肿瘤直径、有无淋巴转移和临床分期有关（P 0.05），与患者肿瘤直径、组织分化程度和临床分期有关（P 5年21例（33.33%），DNMT1阴性表达26例中，生存时间>5年18例（69.23%），DNMT1阳性患者的生存时间显著低于DNMT1阴性患者（χ2=9.634，P = 0.002）；BUC癌组织HMGA2阳性表达58例中，生存时间>5年25例（43.10%），HMGA2阴性表达31例中，生存时间>5年21例（67.74%），HMGA2阳性患者的生存时间显著低于HMGA2阴性患者（χ2=4.911，P = 0.027）。 [7] Xu L，Liao WL，Lu QJ，et al. ANG Promotes Proliferation and Invasion of the Cell of Lung Squamous Carcinoma by Directly Up-Regulating HMGA2 [J]. J Cancer，2016，7（7）：862-871.
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（收稿日期：2017-08-04 本文?辑：张瑜杰）
发表于 2018-8-17 09:11:56