2018三黄片调和物外用抑菌作用实验研究

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　　基金项目 甘肃省中医药管理局科研资助项目（GZK-2010-31）
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　　摘 要 目的：观察三黄片用油或水调和后外用的局部抑菌作用。方法：选取A族乙型溶血性链球菌制作小鼠皮下细菌感染模型，研究三黄片油和水调和物对皮下细菌感染的保护作用。结果：三黄片水调和物大、小剂量及三黄片油调和物大剂量对小鼠皮下A族乙型溶血性链球菌感染有明显抑制作用，与基质对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；抑制作用从给药至第6天最明显。结论：三黄片调和物有明显抑菌作用。
　　关键词 三黄片 调和物外用 抑菌作用 A族乙型溶血性链球菌
　　
　　体表软组织感染是一种常见病，西医治疗效果欠佳；中药外用治疗软组织感染，疗效显著，临床将三黄片用油或水调和用于治疗体表软组织感染，效果较好。本实验将三黄片水调和物和油调和物分大、小剂量组，进行抑菌作用实验研究，以指导临床用药，对基层医疗发展，有重要指导意义。
　　
　　资料与方法
　　实验材料：①试剂三黄片，创新药业有限公司，国药准字Z41020981，批号0903341；食用调和油，西安市金龙鱼食品有限公司，西安市卫食证字［2008］第610100-0521号，批号20100419；将三黄片研成细粉，加调和油，制备1:1（g/ml）调和物备用。将三黄片研成细粉，分别加调和油或蒸馏水，制备1:1（g/ml）调和物备用；A族乙型溶血性链球菌，甘肃中医学院病原教研室提供。②动物：昆明种小鼠112只，SPF级，雌雄各半，18～22g，20±2℃控温和光暗周期各12小时环境饲养，自由饮水，实验动物合格证号：SCXK（甘）2010-0001号，中国农业科学院兰州兽医研究所实验动物中心提供。
　　方法：①小鼠皮下细菌感染模型制作及方法学研究【sup】［1］【/sup】：取小鼠40只，雌雄兼用，实验前24小时，用8%Na【sub】2【/sub】S背部脱毛，面积约2cm×2cm，按体重随机分为8组。取适当浓度A族乙型溶血性链球菌菌液，用平皿表面活菌计数法测定菌液活菌数，浓度8.0×10【sup】8【/sup】CFU（个）/ml，用5%高活性干酵母以10倍稀释成不同浓度的受试菌液，分别取3ml菌液加入7ml琼脂（3%，NS，60℃保温）制备染菌载体，分别取染菌载体0.4ml于小鼠背部脱毛区皮下注射，隆起皮丘者纳入试验，对各小鼠于注射后24小时，第2～7天按评分标准评分，以7天内引起100%死亡（评分总分值50）的最小菌液浓度作为实验时进行感染动物的菌液浓度［结果得最小菌液浓度2.4×10【sup】4【/sup】CFU（个）/ml］。②三黄片调和物对小鼠皮下细菌感染的保护作用：取小鼠72只，雌雄兼用，体重18～22g，随机分成6组，每组12只，设空白对照组、阳性对照组、三黄片油和水调和物大剂量组和小剂量组。给药前动物背部两侧脱毛。各组小鼠分别在脱毛区涂调和油0.4g/只、鱼石脂软膏0.2g/只、三黄片油调和物0.4g/只、三黄片油调和物0.2g/只、三黄片水调和物0.4g/只、三黄片水调和物0.2g/只，1次/日，连续3天，末次给药6小时后，空白对照组各小鼠皮下注射3%琼脂0.4ml，其余各组小鼠以终浓度2.4×10【sup】4【/sup】CFU（个）/ml皮下注射染菌载体0.4ml，注意无菌操作。继续涂药，连续6天，每次涂药前按表10给每只小鼠评分，记录总分值，组间差异采用秩和检验，结果，见表1。
　　统计学处理：所得数据应用SPSS13.0统计软件包进行方差分析，组间资料比较用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。
　　
　　结 果
　　三黄片水调和物大、小剂量及三黄片油调和物大剂量对小鼠皮下A族乙型溶血性链球菌感染有明显抑制作用，与基质对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；抑制作用从给药至第6天最明显。
　　
　　讨 论
　　体表软组织感染是常见病，多发病，中医药外用治疗软组织感染等疾病历史悠久，药物通过皮肤吸收，直达病所，疗效确切，物美价廉，在诸多领域有独特优势。三黄片是一种临床常用的中成药，具有清热解毒、泻火通便作用，在缺少外用药的基层，将三黄片用水或油调和外用，治疗体表软组织感染，取得了较好的疗效【sup】［2］【/sup】。一般认为三黄片由东汉张仲景《金匮要略》泻心汤方剂得来，1997年收载于部版标准【sup】［3］【/sup】，由大黄、黄芩、黄连3味药组成；含有大黄素、大黄酚、盐酸小檗碱、黄芩苷等主要成分，是祖国医学宝库中的传统有效方剂【sup】［4］【/sup】，临床研究三黄片中黄芩黄连煎剂对痢疾杆菌、白喉杆菌、绿脓杆菌、伤寒杆菌、副伤寒感菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、肺炎双球菌、肺炎双球菌、脑膜炎球菌、霍乱弧菌以及金黄色葡萄球菌皆有较强的抗菌作用【sup】［5］【/sup】，但相关外用临床研究较少。本实验选取A族乙型溶血性链球菌制作小鼠皮下细菌感染模型，研究三黄片油和水调和物对皮下细菌感染的保护作用。结果显示，三黄片水调和物大、小剂量及三黄片油调和物大剂量对小鼠皮下A族乙型溶血性链球菌感染有明显抑制作用，与基质对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；抑制作用从给药至第6d最明显，从而证实三黄片调和物外用的的抑菌作用，为三黄片调和物外用治疗局部软组织感染，提供了理论基础；本试验结果可更好指导临床，为三黄片“老药新用”提供了指导。且本实验结果显示，三黄片用油调和外用，仅大剂量组较对照组有统计学意义，而用水调和后，大、小剂量组均有统计学意义。提示三黄片调和外用，用水调和可能较用油调和作用更佳。从理论上中药成分多为脂溶性，当更易溶解于油，用油调和可能作用更好，分析原因可能与所用药物为片剂，研细后与赋形剂淀粉在油中颗粒被包裹，不易溶解，药物皮肤渗透差，而相对更易溶于水有关，得出与水调和效更好的结论，若选用单独药物成分，结果可能会有改变。结合临床外用疗效可靠，将三黄片传统药片捣碎，用水或油调和成糊状，外敷治疗体表软组织感染，方便经济，效果好，安全性高，在广大基层推广应用，可节省医药资源，便于推广，对服务基层医疗有重要意义；为其他中成药外用提供指导。
　　
　　参考文献
　　1 陈奇,主编.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社,2006:262.
　　2 高学敏,主编.中药学［S］.北京:中国中医药出版社,2007:96-98.
　　3 葛金玉.三黄片临床新用举隅［J］.新疆中医药,1997,15（3）:55.
　　4 中华人民共和国卫生部药典委员会.《中华人民共和国卫生部药品标准》中药成方制剂第12册［S］.
　　5 国家药典委员会.中国药典（一部）［S］.北京:化学工业出版社,2005:328.
　　
　　表1 三黄片调和物对小鼠皮下细菌感染的影响