【摘要】目的：观察不孕女性阴道微生态和阴道菌群状况，探讨不孕症女性进行阴道微生态和菌群评价的临床价值。方法：收集本院收治不孕症女性150例，同期100例育龄期体检健康妇女作为对照组；比较两组阴道分泌物的微生态状况和Nugent评分；采取细菌培养法检测两组阴道分泌物菌群分布。结果：对照组和不孕组在阴道分泌物的多样性、密集度、优势菌、pH值以及清洁度方面，比较差异均无统计学意义（P>0.05）。对照组和不孕组的阴道分泌物Nugent评分在≥7分、4～6分和0～3分三个层次比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。对照组和不孕组在培养菌群金黄色葡萄球菌、大肠艾希氏菌、肠杆菌、酵母样菌和表皮葡萄球菌的检出率比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。两组清洁度异常者革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌、革兰阴性球菌、革兰阴性双球菌、霉菌、滴虫、加德纳菌检出率比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：不孕症女性和育龄期健康女性的阴道微生态状况、BV患病率以及阴道菌群分布方面比较无显著性差异。
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【关键词】不孕症；阴道微生态；阴道菌群；Nugent评分
Analysis of vaginal microflora and micro ecological condition in infertility femaleQIN Xiaomei1， SUN Chenghua2. 1.Department of Obstetrics and Gynecology， Fuling District People’s Hospital， Chongqing 408000， China；2.Anesthesiology Department， Fuling Central Hospital， Chongqing 408000， China
【Abstract】Objectives： To observe the vaginal microflora and micro ecological condition in infertility female and discuss its clinical value. Methods： 150 infertile female patients in our hospital were selected as infertility group and 100 healthy women of child-bearing age as control group. Vaginal micro ecological conditions and scores of Nugent were compared between the two groups. Distributions of vaginal microflora were detected by bacterial culture method in two groups. Results： No statically significant differences were observed in intensity， diversity， advantage bacterium， pH value and cleanliness of vaginal secretion between the two groups （P>0.05）. No statistically significant difference were observed it scores of Nugent in vaginal secretion at three levels of ≥7 scores， 4～6 scores and 0～3 scores between the two groups （P>0.05）. No statically significant differences were observed in detection rate of bacteria of staphylococcus aureus， Escherichia coli， enteric bacilli， saccharomycopsis and staphylococcus epidermidis between the two groups （P>0.05）. Furthermore， there was no statistically significant difference in relevance ratio of gram positive coccus， gram negative bacilli， gram negative bacteria， gram-negative diplococcus， mould， trichomonad， and gardnerella for cleanliness anomal between the two groups （P>0.05）. Conclusions： Vaginal micro ecological condition， morbidity of BV and distribution of vaginal pathogenic bacteria show no significant difference between infertile female and normal ones.
【Key words】Infertility； Vaginal micro ecological condition； Vaginal microflora； Scores of Nugent
【中图分类号】R711.6【文献标志码】A
女性阴道微生态体系由阴道解剖构造、阴道微生态菌群以及内分泌系统的调节功能组成。健康女性阴道内存在着不同种类的微生物群落，如乳酸杆菌、酵母菌以及大肠埃希菌等，这些菌落与集体环境间相互协调、相互制约，对阴道正常微生态和菌群的维持发挥了关键作用[1，2]。 目前，女性不孕症是临床常见病，伴随工作压力的增加、社会环境的变化以及性病发病率增多，女性不孕症呈逐年增高趋势[3]。研究证实，阴道感染是导致女性不孕症的重要原因之一[4]。然而，关于不孕女性阴道的微生态及其阴道菌群的研究鲜见报道。本研究选取2014年2月至2015年3月本院收治不孕妇女150例，同期纳入100例育龄健康体检女性作为对照组，对两组研究对象的阴道微生态状况、Nugent评分以及阴道菌群分布进行了评价。现将研究结果报告如下。
1资料与方法
1.1研究对象
选取2014年2月至2015年3月本院收治不孕妇女150例，不孕症依据排卵功能和B超等影像学检测进行确诊，年龄23～40岁，平均（33.15±3.52）岁。纳入标准：（1）月经干净至少3d者；（2）检查前未做阴道冲洗，近1周内未采用阴道药物；（3）检查前3d无性生活史；（4）无阴道炎症状以及性病者；（5）无其他合并症；（6）自愿加入本研究，签署同意协议。同期选取100例育龄健康体检女性作为对照组，该组女性均有正常排卵，卵泡质量良好，年龄22～38岁，平均（32.68±3.49）岁。
1.2研究方法
用无菌棉签从所有研究对象的阴道侧壁上1/3处取得分泌物，采用pH 3.8～5.4精密pH试纸检测分泌物pH值；经革兰染色后在油镜下评价阴道微生态，包括阴道菌群的密集度、多样性、优势菌、炎症反应等状况；同时进行涂盐水湿片，直接光镜检查清洁度、有无真菌菌丝和滴虫。
1.3观察指标
1.3.1菌群密集度评价在100倍油镜下观察，依据每个视野的平均细菌数分为Ⅰ～Ⅳ级[4]；Ⅰ级：l～9个；Ⅱ级：10～99个；Ⅲ级：≥100个或细菌满视野；Ⅳ级：细菌聚集成团。
1.3.2菌群多样性依据可辨别的细菌菌群数目分为Ⅰ～Ⅳ级[4]；Ⅰ级：1～3种细菌；Ⅱ级：4～6种细菌；Ⅲ级：7～10种细菌；Ⅳ级：11种以上细菌。
1.3.3优势菌镜下观察到的最多微生物即为优势菌[5]。
1.3.4清洁度判断标准参照《全国临床检验操作规程》（第4版）制定标准，其中Ⅰ～Ⅱ度为正常，Ⅲ和Ⅲ度以上为炎症。
1.3.5细菌性阴道病参照Nugent等[6制定标准；≥7分为细菌性阴道病（BV）阳性，4～6分为BV中间型，0～3分为正常。
1.3.6细菌培养检测用无菌棉拭子取阴道后穹隆分泌物，将分泌物接种于平板上，置于37℃温箱内进行培养，细菌鉴定应用美国SCAN24鉴定系统。
1.3.7两组清洁度异常者阴道分泌物中微生物观察主要观察指标包括革兰阴性菌、革兰阳性球菌、霉菌、加德纳菌以及滴虫。
1.4指标诊断标准
（1）阴道微生态正常：阴道菌群的多样性和密集度均为Ⅱ～Ⅲ级，优势菌为革兰阳性大杆菌，阴道pH值≤4.5，清洁度为Ⅰ度。（2）阴道微生态失调：阴道菌群的多样性、密集度、优势菌、pH值和炎性反应其中任一出现异常，均可确诊。
1.5统计学处理
数据应用SPSS19.0软件包处理，用χ2检验处理计数资料，P0.05）。见表1。
2.2两组阴道分泌物Nugent评分比较
对照组和不孕组的阴道分泌物Nugent评分在≥7分、4～6分和0～3分三个层次比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见表2。
2.3两组阴道分泌物细菌培养比较
对照组和不孕组培养金黄色葡萄球菌、大肠艾希氏菌、肠杆菌、酵母样菌和表皮葡萄球菌的检出率比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见表3。
2.4两组阴道分泌物清洁度异常者微生物感染分布比较
对照组和不孕组阴道分泌物清洁度异常者的革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌、革兰阴性球菌、革兰阴性双球菌、霉菌、滴虫、加德纳菌的检出率比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。见表4。
3讨论
女性不孕症的病因病机较为复杂，目前已知的因素包括内分泌失调、子宫内膜异位症、输卵管堵塞以及心理障碍等[7-9]。近年，阴道感染已被证实与女性不孕症的发生联系密切。众所周知，射精后精液暂存于阴道后穹窿的精液池，在运动过程中精子脱离精浆而悬浮在生殖道分泌物中。因此，精子是否能够与卵子结合或继续保持良好状态与阴道分泌物密切相关。由于不孕症患者阴道微生态状况和菌群分布改变在临床往往无症状，常易被漏诊。阴道分泌物诊查具有标本提取方便、操作简单、结果直观等特点，可作为不孕症患者临床检查的首选项目。
阴道分泌物是由阴道、前庭大腺、子宫及其周围结构分泌。正常阴道分泌物以乳酸杆菌为主，其分泌物的量、黏稠度、pH值以及化学成分均利于精子的存活、运动。近年，阴道微生态已日益获得国内外学者的重视，关于阴道微生态对不孕症的影响也取得较大进展[10]。目前，阴道微生态的临床诊断指标包括观察菌群的多样性、密集度、优势菌以及阴道清洁度和pH值等。本研究选择本院收治150例女性不孕症患者，同期纳入100例育龄期女性作为健康对照，比较两组研究对象阴道分泌物微生物菌群的多样性、密集型、清洁度、优势菌以及pH值；结果显示，对照组和不孕组在阴道分泌物的多样性、密集度、优势菌、pH值以及清洁度方面，比较差异均无统计学意义（P>0.05）。结果与以往研究报道略有不同，可能与纳入样本量和具体研究对象素质不同相关，但结论与之前报道一致[11]。
BV为阴道内正常菌群失调引起的一种混合阴道感染，伴随致病菌的生长繁殖，其代谢产生可破坏机体的免疫防御系统，使得致病菌进入上生殖道，导致炎症发生，如不及时治疗会引起输卵管扭曲；因此，BV可能是输卵管性不孕的隐患[7]。本研究应用Nugent评分结果显示，对照组和不孕组的阴道分泌物Nugent评分在≥7分、4～6分和0～3分三个层次比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；结果与以往报道近似[11]。 女性阴道内寄生许多细菌，这些细菌相互制约、正常共生，保持阴道的健康状态[12]。目前已知的菌群如乳酸杆菌、肠球菌、大肠杆菌以及棒状杆菌等[13-15]。本研究经细菌培养检出的菌群包括金黄色葡萄球菌、大肠艾希氏菌、肠杆菌、酵母样菌和表皮葡萄球菌；通过比较结果显示：对照组和不孕组的金黄色葡萄球菌、大肠艾希氏菌、肠杆菌、酵母样菌和表皮葡萄球菌的培养检出率比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。
为了进一步探讨不孕症女性阴道微生态状况，笔者对两组清洁度异常者的阴道分泌物的微生物情况进行了分析，结果显示：不孕症患者的阴道分泌物中均可检出革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌、革兰阴性球菌、革兰阴性双球菌、霉菌、滴虫以及加德纳菌；然而与对照组比较，上述指标比较的差异均无统计学意义（P>0.05）。以上细菌对人体均有一定致病性，尤其是革兰阳性球菌和加德纳菌；如加德纳菌为性接触传播疾病的常见病原菌，也是女性非特异性BV最常见病原菌；加德纳菌可分泌阴道溶细胞素，抑制阴道黏膜屏障免疫球蛋白A的作用，激活P38分裂原从而活化蛋白激酶，促进阴道上皮细胞凋亡[16]。至于上述细菌是否对不孕症产生影响有待于进一步探究。
综上所述，不孕症女性与体检健康女性在微生态状态、阴道分泌物Nugent评分以及阴道分泌物细菌培养菌群比较，差异均无统计学意义。然而，尚不能认为女性不孕症与阴道微生态无关。由于阴道分泌物改变不完全是女性不孕症的独立因素，某些情况下可能仅仅是其中的一个中间环节；因此，阴道分泌内容无异常可能和生殖内分泌、免疫异常等相联系，相互作用，促成不孕症的形成、发展。
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发表于 2018-8-15 18:26:21