2018HPLC法测定牛鲜茶中白鲜碱的含量

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　　【摘要】 目的：研究牛鲜茶中白鲜碱的含量测定方法。方法：用乙醇超声提取，以Sapphire C 18。色谱柱为固定相，甲醇一水(52：48，v／v)为流动相，检测波长为220 nm。结果：阴性样品无干扰，方法专属性良好；在244.8ng~~571.2ng范围内，白鲜碱的峰面积与进样量有良好的线性关系，R?2=0.9999；平均回收率为99.5％ ，RSD=0.77％；供试品溶液在8小时内稳定性良好。结论：方法快速，简便准确，可用于该制剂的稳定性考察及成品质量控制。
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　　【关键词】 高效液相色谱法；牛鲜茶；白鲜碱；含量测定
　　
　　【中图分类号】R874 【文献标识码】A 【文章编号】1005-0515(2011)06-0407-02
　　 牛鲜茶是由牛蒡子、白鲜皮等十余味中药材通过提取、干燥后制成茶剂用高温的水浸泡产生的茶汤，包含有多种微量珍贵成分，可快速进入血液循环，清除血液中的毒素和淤积物，清除血毒，促使患者血液结构恢复正常。 平衡血液细胞，可清除血液白细胞营养物质，阻断白细胞过量分泌，从而抑制tnf（肿疡坏死因子）的产生，阻断牛皮癣发病根源。平抑表皮细胞分裂，茶汤中的有效成分结合核心物质“脎酚”，可平抑表皮细胞的活性，使表皮细胞分裂恢复，促使表皮细胞彻底角化，改变表皮层层脱屑状况，杜绝瘙痒，改善皮损。白鲜皮为牛鲜茶的主要成分，而白鲜碱为其重要活性成分，为了能更有效地控制其质量，本文采用高效液相色谱法建立了白鲜碱的含量测定方法。
　　1 仪器与试药
　　日本岛津全自动高效液相色谱仪，型号：LC-20AT，配备LC工作站甲醇为色谱纯，水为重蒸溜水，其余为分析纯。白鲜碱对照品（批号：111654-200301）由中国药品生物制品检定所提供；牛鲜茶（批号：20090504、20090602、20090603）由哈药集团三精千鹤制药有限公司提供，规格均为每袋装1.5克。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件 色谱柱为Sapphire C??18柱(250 mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇一水(52：48)；检测波长：220 nm；流速：1.0 ml/min；进样量10μl；柱温30℃ 。
　　2.2 对照品溶液的制备 精密称取白鲜碱对照品19．4 mg，置于50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
　　2.3 供试品溶液的制备 取本品细粉3.0 g，精密称定，加乙醇20 ml，超声处理10 min，滤过，滤渣再加乙醇20 ml超声处理一次，滤过，合并滤液，减压回收溶剂，残渣加甲醇溶解并转移至10 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45?m微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
　　2.4 阴性干扰试验:取不含白鲜皮的阴性样品，照供试品溶液制备方法制成阴性溶液。精密吸取供试品溶液，阴性溶液，对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪中，绘制液相色谱图。
　　由色谱图提示，在对照品色谱峰相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，阴性溶液在此峰位无吸收，对本制剂中白鲜碱含量测定无干扰，方法专属性良好。
　　2.5 线性试验:精密称取白鲜碱对照品，加甲醇制成每1ml 含1.02mg 的对照品储备溶液，分别精密吸取6ml、8ml、10ml、12ml、14ml对照品储备溶液，置25ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，既得。精密吸取10μl注入液相色谱仪中，测定色谱峰面积，绘制色谱图。测定结果见表。
　　以白鲜碱进样量为横坐标，峰面积为纵坐标做回归曲线，得回归方程为Y=2606X-26476,R?2=0.9999 。由结果可见，白鲜碱进样量在 244.8ng~~571.2ng之间线性关系良好。
　　2.6 精密度试验:精密吸取浓度为0.388mg/ml的白鲜碱对照品溶液10μl，注入液相色谱仪中，测定色谱峰面积，重复进样6次，绘制色谱图。测定结果见表。由结果可见，测定方法精密度良好。
　　2.7 重复性试验:取牛鲜茶样品（批号：20090504），照含量测定项下方法，在同一实验室由同一人进行含量测定，样品6份，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法进样测定绘制色谱图。结果见表。
　　由结果可见，测定方法重复性良好。
　　2.8 回收率试验:取牛鲜茶样品1.5g（批号：20090504， 1.5040g/袋，已知白鲜碱含量1.92mg/g），精密称定，精密加入白鲜碱对照品3mg，照含量测定项下方法进行含量测定，重复6次，绘制色谱图。结果见表。
　　由结果可见，回收率在95％～105％之间，RSD值为0.77％。测定方法回收率良好。
　　2.9 供试品溶液稳定性试验:取牛鲜茶样品（批号：20090504），制成供试品溶液，照上述含量测定项下方法，分别于0、2、4、6、8小时进行含量测定，绘制色谱图。结果见表。
　　由结果可见，供试品溶液在8小时内稳定性良好，含量测定应在8小时内完成。
　　2.10 取3批样品，按上述含量测定项下方法测定含量，结果见表。
　　3 小结与讨论
　　取白鲜碱对照品适量，用流动相溶液溶解，在200～400 nm波长范围内扫描，结果白鲜碱在220 nm处有最大吸收，故选220 nm作为检测波长。
　　在试验过程中，曾采用乙腈一水(30：70)、甲醇一0．3％ 冰醋酸(85：15)等多种流动相，结果色谱峰分离效果均不理想而未被采用。文中选用的流动相：甲醇一水(52：48)分离效果较好。实验中还考察了不同柱温(10、20、30、40℃)对色谱分离效果的影响，结果各柱温对分离效果、保留时间的影响有明显区别，柱温为30℃分离效果好。因此确定以柱温为30℃。
　　本课题采用高效液相色谱法测定牛鲜茶中主要药效成分白鲜碱的含量，具有操作简便，结果准确可靠，重现性好的优点。
　　参考文献
　　[1] 中华人民共和国药典.化学工业出版社.2010年版,一部
　　作者单位：154101 哈药集团三精千鹤制药有限公司
　　注：本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文

  
  
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