2018超敏荧光定量PCR法核酸检测与乙肝两对半联用在乙肝防控中的临床

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　　【摘要】 目的 探讨超敏荧光定量聚合酶链反应（PCR）法核酸检测与乙型肝炎（乙肝）两对半联用在乙肝防控中的?R床应用。方法 155例乙肝患者分别采集血清样本， 利用化学发光法和基于磁珠法自动化核酸提取的超敏荧光定量PCR法分别进行乙肝两对半和乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）检测。结果 155例样本中乙肝两对半共检出12种血清类型， 其中小三阳占58.06%， 大三阳占20.00%。155例样本超敏荧光定量PCR总阳性率为62.58%， 检测下限低至10 IU/ml， 其中小三阳阳性率为66.67%， HBV-DNA平均含量（6.17±0.91）lgIU/ml；大三阳阳性率为90.32%， HBV-DNA平均含量（6.98±1.02）lgIU/ml。小三阳和大三阳组超敏荧光定量PCR阳性率及HBV-DNA平均含量比较差异均有统计学意义（P /6/view-10121136.htm
　　【关键词】 乙型肝炎病毒；磁珠法；核酸提取；超敏；荧光定量；聚合酶链反应
　　DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.09.049
　　乙肝病毒（hepatitis B virus， HBV）是一种嗜肝DNA病毒， 可引起急性肝炎、慢性肝炎、重症肝炎等， 部分患者可演变成肝硬化或肝癌。乙肝已成为世界性公共卫生问题， 我国为乙肝高发区， 人群表面抗原携带率高达7.18%， 慢性乙肝患者约2000万[1]。乙肝流行形势严峻， 及时并准确检测HBV对防控乙肝尤为重要。目前临床多采用免疫学方法检测HBV血清标志物， 包括乙肝表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（HBsAb）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（HBeAb）和乙肝核心抗体（HBcAb）， 即乙肝五项或乙肝两对半， 可反映机体感染后的免疫状态， 但不能直接反映病毒在体内的复制状况， 且对空窗期或者隐匿性乙肝患者易漏检[2]。随着分子诊断技术的进步， HBV-DNA检测技术应运而生， HBV-DNA含量是HBV复制最直接、最可靠的检测指标， 在及时诊断、疗效评价与预后判定方面发挥着重要作用[3]。本研究分别采用化学发光法和超敏荧光定量PCR法对155例乙肝患者的乙肝两对半及HBV-DNA进行检测， 以期阐明二者联用在乙肝防控中的临床应用价值。现报告如下。 1 资料与方法
　　1. 1 一般资料 选取2016年7～9月阳江市公共卫生医院就诊的155例乙肝患者， 男112例， 女43例， 男女比例约为2.60∶1；年龄14～81 岁， 平均年龄42.17岁。
　　1. 2 试剂 乙肝五项检测试剂盒（化学发光法）购自深圳市新产业生物医学工程有限公司；Ex-DNA/RNA病毒核酸提取试剂盒（64 T/盒， 预封装）及HBV核酸定量检测试剂盒（荧光PCR法）（32 T/盒）均购自西安天隆科技有限公司。
　　1. 3 设备 全自动化学发光仪（MAGLUMI 2000 Plus）购自深圳市新产业生物医学工程有限公司；磁珠法自动核酸提取仪（NP968-C）购自西安天隆科技有限公司；荧光定量PCR仪（LightCycler480）购自美国罗氏公司。
　　1. 4 方法 分别按照相应要求各采集5 ml静脉血， 于3 h 内分离血清， 低温保存待检。
　　1. 4. 1 乙肝五项检测 采用化学发光法检测乙肝五项， 即HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb。具体操作按照说明书严格执行， 根据相应标准判定阴阳性。
　　1. 4. 2 HBV-DNA检测
　　1. 4. 2. 1 磁珠法自动化核酸提取 采用磁珠法自动核酸提取系统提取血清样本的HBV-DNA， 按照说明书进行操作， 将核酸产物低温保存备用。
　　1. 4. 2. 2 超敏荧光定量PCR法检测 利用超敏荧光定量PCR法定量检测低温保存的核酸产物， 按照说明书进行操作， 根据定量结果判定阴阳性。
　　1. 5 统计学方法 采用SPSS19.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（ x-±s）表示， 采用t检验；计数资料以率（%）表示， 采用χ2检验。P  　　HBV病毒载量能反映乙肝患者体内HBV复制情况和感染性的强弱， 为患者治疗方案的选择和疗效评价、治??终点判断、耐药和复发监测提供客观依据。传统乙肝治疗中， 常以HBV-DNA参考文献
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　　[收稿日期：2018-01-22]