2018HPV感染与原发性肺癌预后的相关分析
【摘要】 目的 探?人乳头瘤病毒（HPV）感染与原发性肺癌预后的相关性。方法 检测83例肺癌组织中HPV感染情况，比较不同性别、年龄、吸烟、病理类型、肿瘤最大径、临床分期、淋巴结转移、远处转移、胸腔积液及化疗方式情况下，HPV阳性与阴性患者的生存差异。结果 83例肺癌组织中分别检出7例HPV阳性，HPV感染与性别、年龄、吸烟、病理类型、肿瘤最大径、临床分期、淋巴结转移、远处转移、胸腔积液及化疗方式无关（P>0.05）。分层分析结果显示，HPV阳性患者的生存期与阴性患者相比，所有差异均无统计学意义（P>0.05）。Cox多因素回归分析（包含HPV感染因素）显示结果类似，临床分期及淋巴结转移为影响患者预后的独立危险因素。结论 在福建人群中，未发现HPV感染与原发性肺癌预后有明显关联。http://
【关键词】 人类乳头瘤病毒；肺癌；预后
Association between human papillomavirus infection and prognosis of lung cancer
HE Fei1， XIONG Weimin1， XIAO Rendong2， XU Qiuping1， LIU Zhiqiang1， LI Xu2， CAI Lin1
1. Department of Epidemiology and Health Statistics， School of Public Health， Fujian Medical University， Fuzhou 350108， China； 2. Department of Chest Surgery， The First Affiliated Hospital of Fujian Medical University， Fuzhou 350001， China.Corresponding author： Cai Lin， Email： cailin_cn@hotmail.com
【Abstract】 Objective To investigate the association between human papillomavirus （HPV） and prognosis of lung cancer. Methods We examined a series of 83 lung cancer patients from Fujian for the presence of HPV DNA in lung tumor specimens. The survival differences of HPV positive and negative patients were compared between different sexes， ages， non-smoking and smoking， pathological types， maximal diameters of tumor， clinical stages， lymph node metastases， distant metastases， pleural effusions and chemotherapy methods. Results HPV-positiveness was detected to be in 7 out of 83 tumor specimens. There was no significant correlation found between HPV infection and the factors such as genders， ages， non-smoking and smoking， pathologic types， maximum tumor diameters， clinical stages， lymph node metastases， distant metastases， pleural effusions and chemotherapy methods（P>0.05）. Stratification analysis showed that when HPV positive patients were compared with HPV negative ones ， ， all the differences in their survival were not statistically significant （P>0.05）. Cox multivariate regression analysis （including HPV infection） showed similar results， clinical stages and lymph node metastasis were independent risk factors for prognosis . Conclusion These data indicate that HPV is not significantly associated with the prognosis of lung cancer in Fujian.
【Key words】 Human papillomavirus； Lung cancer； Prognosis
Foundation：National Natural Science Foundation of China （81402738）； Youth Research Project of Health and Family Planning Commission in Fujian Province （2014-1-37）； Doctors’ Start-up Foundation Projects of Fujian Medical University （2014MP006） 2012年福建省肿瘤登记地区数据显示，无论男女肺癌均位居死因顺位首位，死亡中标率为26.44/10万人。目前原发性肺癌以在恶性肿瘤中发病率和死亡率增长最快的特点，对福建省人民的健康和生命构成了巨大威胁。70-80%的肺癌患者确诊时已经处于晚期，无法施行手术，极易出现转移，预后极差，5年生存率不足10%。从1979年SYRJANEN首次提出人类乳头瘤病毒（HPV）可导致支气管肺上皮角化，与肺癌发生密切相关后，由于地理区域、种族、检测方法、组织学类型和检材等因素不同，肺癌中HPV感染率波动较大，HPV感染在肺癌发生发展中的作用引起广泛争议。目前评价HPV感染在肺癌中的预后价值的研究，结果具有争议性。为了探索HPV感染与福建人群原发性肺癌预后的相关性，本研究对83例原发性肺癌患者进行随访，分析HPV感染对肺癌患者的生存是否存在影响。
1 对象与方法
1.1 研究对象
收集2013年10月至2015年5月间于福建医科大学附属第一医院胸外科行肺癌手术切除的原发性新发肺癌患者的癌组织标本及临床资料。所有患者均经过病理确诊，且均告知研究内容并签署知情同意书，研究经过福建医科大学伦理委员会批准。所有组织标本术后10分钟内立即放入冻存管中，存放-80℃冰箱备用。
1.2 研究方法
1.2.1 随访 查阅患者的电子病历，收集一般情况（年龄、性别及吸烟）和临床信息（病理类型、TMN分期、肿瘤最大径、治疗方式、胸腔积液、转移等）。“吸烟”定义为累积吸烟大于100 支； “饮酒”定义为每月喝酒精饮料至少1次。所有病例每半年随访一次，截止随访日期为2016年12月31日。以电话随访为主，通过联系患者及其家属，核实患者生存状态。如果连续3次电话随访失败，则通过福建省公安厅和各地公安局、派出所人口信息管理系统查询核实。查询不到结果者以末次电话随访时间或末次出院记录时间作为截止时间。存活时间按月计，失访、死于非肺癌或随访截止时间仍然存活者为截尾数据。
1.2.2 标本检测 方法如之前研究所述，采用黏膜细胞DNA提取试剂盒（凯普公司，中国广东）提取所有标本组织的基因组DNA，并使用DeNovix DS-11超微量紫外可见分光光度计（丹诺尔公司，美国）对所提取的DNA进行浓度及纯度测定。采用21种HPV分型检测试剂盒（凯普公司，中国广东）检测HPV感染情况。
1.3 统计学分析 SPSS 23.0软件用于数据分析。定量资料采用均数±标准差，组间差异比较采用t检验；定性资料采用例数（构成比）表示，组间差异比较采用χ2检验。采用Kaplan-Meier法计算中位生存时间并绘制生存曲线，log-rank对数秩检验比较不同组别间的生存率，Cox等比例风险模型进行预后影响因素的单因素和多因素分析，计算调整风险比（Hazard ratio，HR）和95%可信区间（confidence interval，CI），多因素分析采用逐步后退法（Wald检验）。采用双侧检验，检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 一般情况及肺癌组织HPV感染状况
共纳入83例原发性肺癌病例。男性53例（63.9%），女性30例（36.1%）。确诊年龄为38～82（58.9±9.8）岁；肿瘤最大径1.5～8.0（3.9±1.6）cm。存活68例（81.9%），死亡15例（18.1%）。肺癌组织HPV阳性率为8.4%，7例HPV阳性的具体型别：3例HPV42，2例HPV51，1例HPV44，1例HPV35、42、44多重感染。随访成功68例（81.9%），失访15例（18.1%）。83例患者的肺癌组织HPV感染与一般及临床特征比较结果显示，差异均无统计学意义（P>0.05），如表1所示。
2.2 肺癌患者预后单因素分析
HPV阴性患者中位生存期为55.31（95%CI：49.12-61.51）个月，阳性为26.79（95%CI：19.23-34.34）个月，差异无统计学意义（P=0.739）（图1）。HPV阳性患者一年生存率为（87.6±7.8）%，阴性患者一年生存率为（85.7±2.6）%。调整性别、年龄、吸烟、病理类型、肿瘤最大径、临床分期、淋巴结转移、远处转移、胸腔积液及化疗方式后，HPV阳性患者的生存期与阴性患者相比，差异无统计学意义（HR=0.316，95%CI：0.038-2.626）。分层分析不同性别、年龄、吸烟、病理类型、肿瘤最大径、临床分期、淋巴结转移、远处转移、胸腔积液及化疗方式情况下，HPV阳性患者的生存情况与阴性患者相比，所有差异均无统计学意义（P>0.05），见表1。
2.3 肺癌患者预后多因素分析
针对HPV阳性患者进行的Cox多因素回归分析，由于截尾数据过多，造成建模的迭代过程不收敛，因而无法进行多因素分析；而HPV阴性患者的Cox多因素回归分析结果显示，临床分期及淋巴结转移为影响患者预后的独立危险因素，而针对所有患者的Cox多因素回归分析（包含HPV感染因素）显示结果类似，临床分期及淋巴结转移为影响患者预后的??立危险因素。
3 讨论
HPV与生殖系统肿瘤的致癌作用密切相关，但与呼吸系统恶性肿瘤的关系报道结果差异较大，尚存争议。部分学者认为，高危型HPV感染与肺癌的发生密切相关，并且成为除吸烟外肺癌的第二大致病因素。但也有前瞻性巢式病例对照研究指出没有任何证据支持HPV感染和肺癌之间因果关系。本研究对83例肺癌组织HPV检测结果显示，肺癌组织HPV阳性率为8.4%。进一步分析不同性别、年龄、吸烟、病理类型、肿瘤最大径、临床分期、淋巴结转移、远处转移、胸腔积液及化疗方式情况下HPV检出与肺癌的关系，提示差异均无统计学意义。这与一些研究一致，可能的原因已在之前的研究中探讨。 已有研究发现HPV阳性的口咽癌患者与阴性者相比有更好的结局，而肺癌预后是否与HPV感染有关仍不明确。本研究深入分析HPV阳性与阴性患者生存情况，无论有无对不同性别、年龄、吸烟、病理类型、肿瘤最大径、临床分期、淋巴结转移、远处转移、胸腔积液及化疗方式进行分层分析，均未发现HPV阳性患者与阴性患者的生存期差别具有无统计学意义。但杜华贞等发现非小细胞肺癌（NSCLC）E6、E7和E6/E7蛋白共表达阳性率均显著高于癌旁对照组，HPV16E6、E7蛋白的高表达可以通过提高低氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子而诱导肿瘤血管生成，从而促进肿瘤生长与扩散，导致不良预后。有报道，HPV-16阳性NSCLC患者的术后3年生存率（39.3%）、5 年生存率（34.3%）低于HPV-16阴性者（59.9%、44.7%）（ P> 0. 05），说明HPV-16 阳性表达的NSCLC患者的生存率较阴性表达者有下降的趋势。但Ragin C等发现尽管差异无统计学意义（P log-rank =0.263），但HPV16、18阳性的肺癌患者2年及5年生存率（71.4%、64.3%）高于阴性者（60.9%，38.5%）。本研究HPV阳性者随访时间尚短，虽然无统计学意义，但也存在一年生存率与阴性者相比较高的特点。研究认为受HPV感染的肺癌组织HPV E6、E7癌蛋白表达过度会下调p53蛋白，导致HPV阳性肺癌患者预后更好。
目前已有的HPV感染与肺癌预后的关系结论相悖，由于这方面的预后研究较少，因此还需进一步深入研究。
本研究结果显示在福建人群中，未发现HPV感染与肺癌预后之间的关联。但由于研究样本量较小和随访时间较短，许多情况下无法建模，影响了HPV感染对肺癌患者生存状态的判断。有必要扩大样本量，延长随访时间，进一步探索福建人群HPV感染与原发性肺癌生存情况的关系。
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