2018RP―HPLC检测不同pH条件下毛诃子中单宁酸等4种多酚化合物含量变
摘要：目的 应用RP-HPLC法分析在不同的 pH 溶液中，毛诃子中Tannins、GA、β-PGG及Corilagin的含量?化。方法 将毛诃子粉末分别采取回流提取方法的产物加入 pH 为2-7缓冲液，用反相高效液相色谱测定单宁酸、没食子酸、β-PGG 及柯里拉京的含量并分析。结果 毛诃子中单宁酸含量随pH增大而增加；没食子酸含量随pH增大而变化不明显；β-PGG含量随pH增大而减小；柯里拉京含量随pH增大而减小。结论 通过研究不同pH条件下毛诃子中的Tannins、GA、β-PGG 及Corilagin的含量变化，可为毛诃子中相关成分的质控提供一定理论参考。http://
关键词：毛诃子；单宁酸；没食子酸；β-PGG；柯里拉京；RP-HPLC
中图分类号：R9272 文献标志码：A 文章编号：1007-2349（2017）10-0072-04
Determination of Content Changes of Four Tannin Polyphenolic Compounds in Fructus
Terminaliae Billericae by RP-HPLC under Different pH Conditions
MA Ding-gan， CHEN Ping， HUA Jie， ZUO Xiao-shuang， FAN Yuan
（Yunnan University of Traditional Chinese Medicine， Kunming 650500， China）
【Abstract】Objective： To analyze the contents of tannins， agllic acid， β-PGG and corilagin in Fructus Terminaliae Billericae in different pH solutions by using RP-HPLC Methods： The products extracted from Terminaliae Billericae powder by reflux extraction were joined with 2 to 7 pH buffer solution and the contents of tannic acid， gallic acid， β-PGG and corilagin were determined and analyzed by RP-HPLC Results：The content of tannic acid increased with the increase of pH The content of gallic acid changed unapparently with the increase of pH The content of β-PGG decreased with the increase of pH The content of corilagin decreased with the increase of pH Conclusion： By studying the content changes of tannins， GA， β-PGG and corilagin in Fructus Terminaliae Billericae under different pH conditions， we can provide some theoretical reference for the quality control of related components in Fructus Terminaliae Billericae
【Key words】Fructus Terminaliae Billericae， tannic acid， agllic acid， β-PGG， corilagin， RP-HPLC
毛诃子（terminaliae belliricae fructus）系藏族习用药材，主产于云南、西藏地区。为使君子科植物毗黎勒Terminalia bellirica（Gaertn）Roxb的干燥成熟果实。始载于《唐本草》，具有发表透疹，清热解毒，升举阳气等功效。现代药理学研究表明，毛诃子具有抗氧化性、治疗CCl4引起的肝损伤、降低胆固醇作用、抗菌作用及降低由四氧嘧啶引起的糖尿病大鼠的血糖等作用。毛诃子所含化学成分有鞣质类、三萜类、强心苷类、木质素类及多糖类等。单宁酸类物质为毛诃子主要抗氧化、抗肿瘤、抗菌等药理作用的主要活性成分之一。
Bharathi等研究发现，毛诃子中的单宁类物质为单宁酸（Tannins）、没食子酸（Gallic acid，GA）、鞣花酸（Ellagic acid）、没食子酸甲酯（Methyl gallate）、柯里拉京（Corilagin）以及1，2，4，6-五酰基葡萄糖（1，2，3，4，6-penta-O-galloylβ-D-glucos，β-PGG）。
毛诃子作为滇藏地区常用药材，有很高的药用价值，目前对于毛诃子中以上几种物质的含量随pH变化的研究的报道较少。本实验欲通过对不同pH条件下毛诃子中单宁酸、没食子酸、β-PGG及柯里拉京含量进行测定，为云南地区毛诃子资源开发、质量标准设定及工业运用提供一定的理论参考。
1 材料与方法
11 实验材料与试剂 毛诃子干燥果实（购自安国市旭芳中药材经营有限公司），单宁酸标准品（购自成都迈斯克医药科技有限公司，批号：130721），没食子酸标准品（购自云南昆明中检所，批号：110831-201204），β-PGG标准品（购自成都普瑞法科技开发有限公司，批号：14021908），柯里拉京标准品（成都普瑞法科技开发有限公司，批号：14021908），甲醇（分析纯）磷酸（分析纯），甲醇（色谱纯），乙腈（色谱纯），纯净水。 12 实验仪器 Agilent1200 型高效液相色谱仪（VWD 检测器）DFY-600摇摆式高速万能粉碎机，D2KW-D电热恒温水浴锅，SK250HP型超声清洗机（上海科导），分析天平，pH计（OHAUS/奥豪斯，型号STARTER3100/F）。
13 方法
131 样品制备 称取1 g毛诃子粉末，加入30 mL上述混合溶液，70℃水浴条件下回流30 min，过滤浓缩得到浸膏，将浸膏分为6等份，分别加入10 mL pH为2，3，4，5，6，7的缓冲溶液溶解，即得到供试样品。
132 色谱条件 色谱柱C18柱（46×250 mm，5 um，Digma）；Tannins 甲醇-水（80：20）为流动相；流速为1 mL/min；检测波长为275 nm；柱温：25℃；GA 甲醇-02%磷酸（5：95）为流动相；流速为1 mL/min；检测波长为273 nm；柱温：25℃；β-PGG 梯度0 min乙腈-01%磷酸（10：90）；15 min乙腈-01%磷酸（25：75）流动相洗脱分析25 min；流速为1 mL/min；检测波长为281 nm；柱温：25℃；Corilagin 梯度0 min乙腈-01%磷酸（5：95）；10 min乙腈-01%磷酸（10：90）；15 min乙腈-01%磷酸（13：87）；20 min乙腈-01%磷酸（15：85）；30 min乙腈-01%磷酸（17：83）流动相洗脱分析30 min；流速为08 mL/min；检测波长为220 nm；柱温：25℃。
133 标准曲线的制作及供试品含量的测定 各个对照品按上述色谱条件分别按进样量1 μL，3 μL，5 μL，7 μL，9 μL，11 μL进样，得到单宁酸的峰面积（Y）及进样量所对应单宁酸的含量（X）的线性回归，分别在023-253μg；006-066μg；022-242μg；02-22μg范围内线性关系良好，得到方程 Y=1706X-3196，r=0994；Y=2248X+ 6816，r=0999；Y=2248X+ 6816，r=0999；Y=2820X+1375，r=999。按上述色谱条件将不同pH的供试液分别进样10μL，得到峰面积，代入回归方程计算出不同pH条件下相应化合物的含量。
134 稳定性、精密度及重复性考察 实验分别对以上四个标准对照液?M行了精密度实验及0 h、1 h、2 h、4 h、6 h和8 h的稳定性实验，Tannins、GA、β-PGG及Corilagin标准对照溶液的精密度实验RSD分别为6333%，0152%，4450%，3680%，表明仪器精密度良好。以上四种化合物标准对照溶液的8h稳定性实验RSD为2696%，2850%，4460%，4490%，表明Tannins、GA、β-PGG及Corilagin标准液1 h-8 h稳定性良好。
2 结果
不同pH条件下毛诃子中单宁酸，没食子酸，β-PGG及柯里拉京含量（如表1、表2、表3、表4）。
不同pH条件下毛诃子中单宁酸没食子酸，β-PGG及柯里拉京变化趋势（图1，图2，图3，图4）。
3 结论
本实验研究了不同pH条件下毛诃子中Tannins、GA、β-PGG及Corilagin的含量变化结果表明Tannins含量随pH的增大而增大，原因可能是在酸性条件下分解，随着pH升高，其分解减少；GA含量随pH升高而变化不明显；β-PGG含量随着pH增大含量减小，原因可能是Tannins分解越来越少导致的其含量减少；Corilagin含量随着pH的变化先增大后减小，可能是Tannins分解减少以及自身分解的原因。
毛诃子作为主产于云南的常用藏方三果汤其中的一味，具有潜在而大的价值。在2010版《中国药典》一部中对毛诃子在质控方面用浸出物测定法项下的冷浸法测定，没有根据具体成分规定质控。本实验对不同pH条件下毛诃子中Tannins、GA、β-PGG及Corilagin含量变化进行了研究，或许可以为毛诃子中相关成分的质控、提取加工以及养护提供一定理论参考。
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