2018微小RNA21和TGF―β1在正常皮肤和增生性瘢痕组织中的表达研究
[摘要]目的：探讨微小RNA-21（miRNA-21）基因与转化生长因子-β1（transforming growth factor-β，TGF-β1）基因在正常皮?w组织和增生性瘢痕组织中的表达，并分析其相关性。方法：选取本院烧伤整形科收治的16例烧伤整形患者的增生性瘢痕组织及其临近的正常皮肤组织，提取组织中的总RNA，采用实时荧光定量PCR（realtime fluorescence quantitative PCR，RT-qPCR）技术分别检测增生性瘢痕组织和正常组织中miRNA-21与TGF-β1基因表达量，对检测结果进行分析比较，并行相关性分析。结果：增生性瘢痕组织中miRNA-21基因表达明显上调，差异具有统计学意义（P http://[关键词]增生性瘢痕；微小RNA21；TGF-β1
[中图分类号]R619+.6 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2017）10-0068-03
Abstract： Objective To investigate the expression of microRNA-21 （miRNA-21） gene and transforming growth factor-β（TGF-β1） gene in normal skin and hypertrophic scar tissue， and to analyze its correlation. Methods Collected from 16 hypertrophic scar tissues and adjacent normal skin tissues formed by burn and plastic surgery department in our hospital， total RNA was extracted from normal tissues and Hypertrophic scar tissue. The expressions of miRNA-21 and TGF-β1 gene in hypertrophic scar tissue and normal tissue were detected by RT-qPCR. The detection results were analyzed and compared， and the correlation analysis was carried out. Results The expression of miRNA-21 gene in hypertrophic scar tissue was significantly up-regulated， the difference was statistically significant（P 1 材料和方法
1.1 标本来源：收集本院2016年1月到2017年5月收治的16例??伤整形患者术中切取的增生性瘢痕组织和临近正常皮肤组织。其中男9例，女7例，年龄18～60岁；致伤部位：颌面部6例，上臂4例，膝关节2例，大腿4例；瘢痕面积：4.0cm×3.0cm～6.0cm×5.5cm。纳入标准：①瘢痕增生时间为9～18个月，局部皮肤色泽鲜红，质地较硬；②发病后未长时间服用瘢痕增生抑制药物，包括放射或注射治疗；③无全身系统性纤维化、肿瘤等病史，术前1个月内未使用激素类药物；④患者均知情同意，自愿签署知情同意书。本次研究获得本院医学伦理委员会批准同意。
1.2 试剂：Trizol试剂购自日本Takara公司；PrimeScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒购自日本Takara公司；微小RNA分离试剂购自ABI公司；实时定量RT-qPCR仪购自美国ABI公司。
1.3 实验方法
1.3.1 RNA制备：从液氮中取出标本约100mg，用移液器吸取1ml Trizol溶液加入到组织中，于冰上研磨搅匀，后续RNA提取步骤参照Trizol试剂盒说明。总RNA在紫外分光光度计上检测260nm、280nm波长处的吸光度（A）值，并计算A260/A280比值，采用1.8～2.0者进行下一步实验操作。cDNA的合成严格按照PrimeScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒说明书进行，将产物cDNA冻存于-80℃备用。
1.3.2 RT-qPCR检测mRNA表达水平：采用美国ABI公司RT-PCR仪检测mRNA表达水平。建立总体积20μl反应体系：包括10μl SYBR荧光（定量）染料，2μl cDNA，0.4μl ROX 染料，7.1μl ddH2O，上下游引物各为0.25μl，引物序列见表1。定量PCR的反应条件：95℃ 10min，95℃ 15s，60℃ 1min，共40个循环。结果以每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数用Ct值表示。每份标本均作复孔，反应结束后作熔解曲线。ΔCt=目的基因Ct值-减去内参Ct值，2-ΔΔCt值表示目的基因mRNA表达水平的高低。
1.4 统计学分析：采用SPSS 19.0统计软件分析实验数据，以均数±标准差（x?±s）表示miRNA-21与TGF-β1 mRNA表达水平，行配对t检验，变量间相关关系采用Pearson相关分析，以P 通过对增生性瘢痕组织中miRNA-21和TGF-β1的表达量进行相关性分析发现，增生性瘢痕组织中miRNA-21基因表达量与TGF-β1基因表达量呈正相关。miRNA-21可能通过调节TGF-β1而在增生性瘢痕组织中发挥作用。最近的研究发现TGF-β1诱导成纤维细胞增生，导致miRNA-21表达量增加，加速纤维化进程，促使增生性瘢痕组织形成，这也与本研究结论基本一致。有研究发现，miRNA-21还可以通过调节TGF-β-Smad信号转导通路促进间质干细胞向成脂细胞分化和抑制人脂肪源干细胞增殖，推测也可能通过次信号通路参与增生性瘢痕组织的形成和发展过程。
综上，增生性瘢痕组织中miRNA-21与TGF-β1基因表达量异常，显著高于正常皮肤组织，可能与瘢痕组织形成相关。但其具体机制尚需在成纤维细胞中进行miRNA21的沉默表达实验加以完善。
[参考文献]
Boo S，Dagnino L.Integrins as Modulators of Transforming Growth Factor Beta Signaling in Dermal Fibroblasts During Skin Regeneration After Injury.Adv Wound Care（New Rochelle），2013，2（5）：238-246.
Xiao K，Luo X，Wang X，et al.MicroRNA-185 regulates transforming growth factor-β1 and collagen-1 in hypertrophic scar fibroblasts.Mol Med Rep，2017，15（4）：1489-1496.
宁璞，刘德伍，毛远桂，等.增生性瘢痕与正常皮肤微小RNA的差异表达谱分析.中华医学杂志，2012，92（10）：692-694.
丁凤云，兰建云，刘洪，等.病理性瘢痕组织中转化生长因子β1的表达及其临床病理学意义.临床与实验病理学杂志，2011，27（10）：1120-1121.
胡洋红，刘德伍，胡杨柳，等.微小RNA21和程序性细胞死亡因子4在人增生性瘢痕中的表达.中华烧伤杂志，2013，29（5）：479-481.
Guo L，Xu K，Yan H，et al.MicroRNA expression signature and the therapeutic effect of the microRNA-21 antagomir in hypertrophic scarring.Mol Med Rep，2017，15（3）：1211-1221.
Crea F，Clermont PL，Parolia A，et al.The non-coding transcriptome as a dynamic regulator of cancer metastasis.Cancer Metastasis Rev，2014，33（1）：1-16.
Cheng Q，Yi B，Wang A，et al.Exploring and exploiting the fundamental role of microRNAs in tumor pathogenesis.Onco Targets Ther，2013，6：1675-1684.
Volinia S，Calin GA，Liu CG，et al.A microRNA expression signature of human solid tumors defines cancer gene targets.Proc Natl Acad Sci U S A，2006， 103（7）：2257-2261.
梁??，侯春，冀航，等.miR-21在增生性瘢痕成纤维细胞增殖及青蒿琥酯等药物作用下表达情况的实验研究.中国美容医学，2017，26（3）：80-83.
Gao Y，Lu J，Zhang Y，et al.Baicalein attenuates bleomycin-induced pulmonary fibrosis in rats through inhibition of miR-21.Pulm Pharmacol Ther，2013，26（6）：649-654.
胡洋红，胡杨柳，刘德伍，等.增生性瘢痕与正常皮肤组织差异表达基因的筛选与生物信息学分析.南方医科大学学报，2014，34（7）：939-944.
Linares HA.From wound to scar.Burns，1996，22：339-352.
Lian N，Li T.Growth factor pathways in hypertrophic scars： Molecular pathogenesis and therapeutic implications.Biomed Pharmacother，2016，84：42-50.
Schuman J，Chen Y，Podd A，et al.A critical role of TAK1 in B-cell receptor-mediated nuclear factor kappaB activation.Blood，2009， 113（19）：4566-4574.
Sakurai H.Targeting of TAK1 in inflammatory disorders and cancer.Trends Pharmacol Sci，2012，33（10）：522-530.
邱林，金先庆，田晓菲，等.正常皮肤和瘢痕组织TGF-β1的表达及胶原构成与年龄相关性研究.中华小儿外科杂志，2006，27（8）：393-396.
张奇，王琛.microRNA-21调控TGF-β通路促进增生性瘢痕形成的机制研究.组织工程与重建外科，2014，10（6）：318-323.
郑金绚，吴莉萍.微小RNA21与干细胞之间的关系.国际口腔医学杂志，2014，41（6）： 716-719.
[收稿日期]2017-08-21 [修回日期]2017-09-04
编辑/朱婉蓉
页:
[1]